[发明专利]一种快速高效的花椒转基因方法

说明书

本发明公开了一种快速高效的花椒转基因方法，花椒转基因高效遗传转化包括如下步骤：(1)植物材料准备；(2)侵染菌体准备；(3)侵染；(4)延长培养；(5)筛选培养；(6)鉴定阳性芽；(7)转基因成苗。本发明采用上述的一种快速高效的花椒转基因方法，能够有效地转移特定优良性状，快速高效地选育花椒新品种。

技术领域

本发明涉及植物基因工程技术领域，尤其是涉及一种快速高效的花椒转基因方法。

背景技术

花椒属芸香科花椒属植物，耐干旱瘠薄，根系发达，适应性强，因其极高的经济价值和生态价值，被认为是我国主要的生态绿化树种之一。除生态价值外，花椒还是我国重要的调味品、香料及木本油料树种，具有很高的利用价值。在生产实践中人们需要在提高花椒产量、降低采摘难度、提高树种抗性和改良品质等方面进行改良，药用或食用等产品加工上也需要特异性改变某些物质的含量，因此，花椒属植物的育种工作有必要长期而持续地进行。

我国花椒种质资源十分丰富，大量的生态地理变型和无融合生殖导致的较高遗传稳定性为花椒的育种工作奠定了物质和理论基础。目前花椒的遗传改良主要依靠自然变异，但变异率低及变异的不确定性，使得花椒种质创新和良种繁育工作一直没有取得突破性进展。虽已有一些花椒人工育成品种，但远不能满足生产的需求。因而开辟花椒育种新途径具有重大研究意义。

传统育种技术对新品种的培育受限于种内与种间杂交隔离，很多重要的性状无法通过常规育种方法进行改良。且传统育种技术耗时较长，效率较低。与之相比，转基因技术具有高效性、精准性等优点，可以缩短育种周期，解决杂交育种可能出现的问题，更有效地转移优良性状，培育具有产量高、果粒大、高精油、高抗性、药用价值高、无刺的花椒新品种，创造出花椒优异种质。因此，建立完整的花椒遗传转化体系，将优良性状集中到某一个品系上，是实现花椒种质创新及性状改良的一个有效途径。

发明内容

本发明的目的是提供一种快速高效的花椒转基因方法，能够有效地转移特定优良性状，快速高效地选育花椒新品种。

为实现上述目的，本发明提供了一种快速高效的花椒转基因方法，花椒转基因高效遗传转化包括如下步骤：

(1)植物材料准备

将花椒叶片外植体消毒，切成0.5cm×0.5cm的小块，预培养2d；

(2)侵染菌体准备

在添加卡那霉素的LB培养基上挑取单克隆于10ml LB培养基小摇过夜，然后吸取上述菌液500μL再加50mL LB抗性培养基摇菌过夜；

再于5000r/min离心5min收集菌体，然后用50mL的M20培养基重悬菌体，并控制OD值在0.4-0.6之间；

(3)侵染

28℃100r/min侵染8min；

(4)延长培养

用500mg/LCef头孢冲洗侵染材料后转入含有250mg/L Cef的分化培养基，暗培养2d；

(5)筛选培养

再次转入含有25mg/L kan、250mg/L Cef的分化培养基培养30d；

(6)鉴定阳性芽

(7)转基因成苗。

优选的，步骤(2)中，LB抗性培养基中添加卡那霉素500mg/L、利福平250mg/L和庆大霉素500mg/L。

优选的，步骤(2)中，M20培养基中含AS乙酰丁香酮和Bet甜菜碱。

优选的，步骤(3)中，侵染后将叶块用无菌滤纸吸干后转移至共培养基中，于暗处共培养3d。