[发明专利]一种血清和粪便中吲哚乙酸和吲哚丙酸的检测方法

权利要求书

1.一种血清和粪便中吲哚乙酸和吲哚丙酸的检测方法，包括前处理和液相色谱质谱检测，其特征在于：前处理步骤包括：

工序一：按比例配制甲醇：水：甲酸混合溶剂作为提取液，对粪便或血清样品进行萃取得到萃取液；

工序二：将萃取液过已活化的Oasis HLB固相萃取小柱进行净化和富集，收集洗脱液进行测定；

所述工序一的具体过程为：粪便或血清样品中加入吲哚乙酸-d5和吲哚丙酸-d2的混合内标溶液，再加入提取液进行超声萃取，然后离心取上清液，再加入等量的提取液重复上述步骤，合并上清液得到萃取液；

甲醇：水：甲酸的体积比为(15-16)：(4-5)：(1-2)；

对粪便样品进行萃取时，需要先在低温密闭条件下进行研磨均质；在3-5℃下进行研磨；

当针对粪便进行萃取时，粪便与提取液的添加比为0.05g：1mL；当针对血清进行萃取时，血清与提取液的体积比为1：9；

所述液相色谱质谱检测中，液相检测条件为：

色谱柱：ACQUITY BEH C18，流动相A为0.1％甲酸水溶液，B为乙腈；

洗脱程序为：0～0.5min，10％B；0.5～2.0min，10％～95％B；2～3min，95％B；3～3.5min，95％～10％B；3.5～5min，10％B；

色谱柱的规格:2.1×50mm，1.7μm；进样量1-3μL；流速0.1-0.3mL/min；

质谱检测条件为：电喷雾离子源，正离子扫描ESI⁺，多反应监测MRM模式，毛细管电压：2.5kV；离子源温度：150℃；

脱溶剂气温度：250℃；锥孔气流量：150L/hf；脱溶剂气流量：600L/hf；吲哚乙酸定性离子对m/z 176.1/103，锥孔电压25V，碰撞能20eV，定量离子对m/z 176.1/130，锥孔电压25V，碰撞能20eV；吲哚乙酸-d5定性离子对m/z 181.1/106，锥孔电压20V，碰撞能8eV，定量离子对m/z 181.1/134，锥孔电压20V，碰撞能30eV；吲哚丙酸定性离子对m/z190/171.9，锥孔电压30V，碰撞能19eV，定量离子对m/z 190/130，锥孔电压30V，碰撞能10eV；吲哚丙酸-d2定性离子对m/z 192/55.9，锥孔电压12V，碰撞能12eV，定量离子对m/z192/130，锥孔电压12V，碰撞能16eV。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：甲醇：水：甲酸的体积比为15：4：1。

3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述萃取过程在超声环境下进行，萃取时间为15-20min。

4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：工序二中取500-700μL萃取液，过已活化的Oasis HLB固相萃取小柱进行净化和富集。