[发明专利]一种矮牵牛耐涝性综合鉴定方法

权利要求书

1.一种矮牵牛耐涝性综合鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：淹水处理

选择生长一致的矮牵牛的8周生根苗，每个株系各18盆，分别进行正常水分处理和涝渍胁迫处理；

步骤2：生理生化指标测定与分析

①测定叶片抗氧化酶活性，包括POD酶活性、SOD酶活性和CAT酶活性；

②测定叶片无氧呼吸酶活性，包括ADH酶活性、PDC酶活性和LDH酶活性；

③测定叶片丙二醛含量；

④测定叶片净光合速率；

⑤测定可溶性蛋白含量；

⑥测定胞间CO2浓度；

⑦测定气孔导度；

⑧测定蒸腾速率；

⑨测定根系活力；

⑩测定叶绿素含量；

用Excel统计数据，计算平均值和标准偏差，并运用公式计算综合得分；用SPSS软件进行分析处理，采用单因素方差分析，用Duncan多重比较检验在P＜0.05和P＜0.01水平上不同品种植株的差异，3次重复；运用SPSS软件对前述单项指标进行主成分分析且进行综合评定，确定矮牵牛耐涝等级；

步骤3：评价体系的建立

S1：生理生化数据耐涝主成分分析

①总方差解释

对前述14个单项指标的耐涝系数进行主成分分析，所述主成分分析包括光合指标、无氧呼吸指标和抗氧化指标，根据表1得到总方差解释，所述光合指标、无氧呼吸指标和抗氧化指标的贡献率分别为35.658％、22.809％和16.326％，累积贡献率为74.793％；根据表1，光合指标、无氧呼吸指标和抗氧化指标代表了前述14个单项指标的74.793％的信息，可分别用光合指标、无氧呼吸指标和抗氧化指标对矮牵牛品种耐涝性进行概括分析；

表1总方差解释

②主成分表达式

前述指标对应的特征向量表达式分别为:

Z1＝-0.843*ZX1-0.475*ZX2-0.654*ZX3-0.298*ZX4+0.726*ZX5-0.077*ZX6+0.043*XZ7+0.551*ZX8+0.739*ZX9+0.874*ZX10-0.096*ZX11+0.945*ZX12+0.883*ZX13-0.301*ZX14；

Z2＝0.301*ZX1-0.681*ZX2+0.116*ZX3+0.847*ZX4+0.726*ZX5+0.790*ZX6+0.597*XZ7+0.032*ZX8-0.478*ZX9+0.204*ZX10-0.134*ZX11+0.051*ZX12-0.332*ZX13+0.016*ZX14；

Z3＝0.208*ZX1+0.363*ZX2+0.052*ZX3+0.321*ZX4-0.023*ZX5-0.012*ZX6-.353*XZ7+0.633*ZX8+0.057*ZX9-0.073*ZX10-0.849*ZX11+0.102*ZX12-0.084*ZX13+0.855*ZX14；

其中：Z1为光合指标、Z2为无氧呼吸指标、Z3为抗氧化指标、ZX1为POD酶活性、ZX2为SOD酶活性、ZX3为CAT酶活性、ZX4为LDH酶活性、ZX5为ADH酶活性、ZX6为PDC酶活性、ZX7为叶片丙二醛含量、ZX8为叶绿素含量、ZX9为叶片净光合速率、ZX10为气孔导度、ZX11为胞间CO2浓度、ZX12为蒸腾速率、ZX13为根系活力、ZX14为可溶性蛋白含量；

由以上表达式以及表2公开的成分得分系数矩阵可知，所述光合指标中叶绿素含量、净光合速率、气孔导度、蒸腾速率、根系活力的系数较大，所述无氧呼吸指标中LDH酶活性、ADH酶活性、PDC酶活性、POD酶活性、MDA含量的系数较大，所述抗氧化指标中POD酶活性、SOD酶活性、CAT酶活性、叶绿素含量和可溶性蛋白含量系数较大；

表2成分得分系数矩阵

S2：生理生化涝害指数综合分析

①综合指标权重

所述光合指标、无氧呼吸指标和抗氧化指标的贡献率的权重分别为0.4767、0.3050和0.2183，根据综合评价公式＝0.4767*Z1+0.3050*Z2+0.2183*Z3，得到矮牵牛PhERF2转基因株系及其野生型的综合得分，根据得分判定矮牵牛的耐涝性；

②生理生化指标等级评定

表3生理生化指标定级范围及得分标准

2.根据权利要求1所述的一种矮牵牛耐涝性综合鉴定方法，其特征在于，所述涝渍胁迫处理为对盆栽淹水处理，淹水至根部2-3cm，分别于淹水的0d、1d、2d、3d取处理植株叶片重复3次，取下后放在液氮中，随后转移至-80℃冰箱保存备用。