[发明专利]一种快速提取生物核酸的样品处理方法

权利要求书

1.一种快速提取生物核酸的样品处理方法，其特征在于包括以下步骤：

a)处理生物样品，包含但不限于液氮冷冻研磨法、机械研磨法、高速离心法和/或加入防止核酸降解的抑制剂等，以获得小体积的细胞和/或极细小生物组织聚集体；

b)加入小体积高浓度的蛋白酶，包含但不限于，蛋白酶K，蛋白酶，消解酶，无色肽酶，溶细胞酶，溶葡萄球菌酶，溶菌酶和核酶等。

2.根据权利要求1a)所述，其特征在于：对固态生物样品，加入和/或核酸降解抑制剂和/或再加入高浓度的酶，经过包含但不限于液氮冷冻研磨法、机械研磨法等，获得极细小的生物样品组织；对于液体中含有细胞的生物样品，和/或加入防止核酸降解的抑制剂，离心去除上清，获得生物样品细胞。

3.根据权利要求1b)所述，其特征在于：和/或加入高浓度蛋白酶，具体来说大于0.2mg/ml，优选在2mg/ml～50mg/ml，更有选在5mg/ml～30mg/ml；所用高浓度蛋白酶体积在1ul～100ul，优选在5ul～50ul，更优选在10ul～30ul；把酶和经过步骤a)处理后的生物样品混匀，放置一段时间，优选1分钟～10分钟。更优选1分钟～3分钟。

4.根据权利1实施方式，处理后的生物样品核酸提取方法包含以下步骤：

A)把酶解后的生物样品与裂解液混匀；

B)在含有核酸的裂解液和/或溶液和/或支化或非支化链烷醇的存在下，将释放的核酸固定到基于一种基质或一种以上基质混合物上，包含但不限于离心柱、磁球等；

C)任选地洗涤固定在基质上的核酸；

D)任选地洗脱结合在基质上的核酸。

5.根据权利要求4B)所述，其特征在于，所述的结合试剂包含但不限于支化或非支化的链烷醇，具体说，具有1～5个碳原子的短链支化或非支化链烷醇。支化或非支化丁醇包括正丁醇、异丁醇、仲丁醇、和叔丁醇；支化或非支化戊醇包括例如正戊醇和异戊醇。优选使用选自下组的醇：甲醇、乙醇、异丙醇、和/或其混合物，尤其优选使用选自下组的醇：乙醇、异丙醇和/或其混合物。

6.根据权利要求4C)所述，其特征在于，所述的使用的洗涤剂可以是常规缓冲剂或者任何其他合适的介质。通常，优选具有低到中度离子强度的洗涤剂，例如10mM三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)的溶液和/或0.05M～0.2M柠檬酸钠溶液等。还可使用具有较高盐浓度的洗涤缓冲剂，例如4M～6M盐酸胍的溶液。如上所述，本发明的洗涤试剂类似地是合适的洗涤试剂。例如具有1～5个碳原子的醇的水溶液，优选乙醇的水溶液，具体是含50～100％乙醇的水溶液。清洗次数：一次或一次以上。

7.根据权利要求4D)所述，其特征在于，所述的洗脱试剂，可使用低盐含量的核酸洗脱剂，如：含盐量小于0.1M的试剂作为低盐含量的洗脱试剂。尤其优选包含缓冲化合物三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)的洗脱试剂和/或0.01％～0.02％DEPC水溶液等。尤其适用于洗脱的还有软化水，任选地包含一种或多种添加剂，例如螯合剂如乙二胺四乙酸(EDTA)、叠氮化合物和/或缓冲化合物如三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)等。还可以使用包含被高温高压处理过的0.2％DEPC水。洗脱次数：一次或一次以上。

8.根据权利要求1b)和4D)所述，其特征在于，：步骤1b)和步骤4的(A)、(B)、(C)和(D)均在室温下完成的，也可以在高温下完成，例如：30℃～95℃。

9.一种用于实施如权利要求1～9任一项所述方法的试剂盒，具体来说包含但不限于，唾液核酸快速提取试剂盒、口腔细胞核酸、动物组织及细胞核酸快速提取试剂盒等，以及记载如权利要求1～9任一项所述方法的载体。

10.一种计算机可读载体，其记载包含用于实施如权利要求1～9任一项所述方法的计算机程序。连接的控制器；所述控制器包含如权利要求9所述的计算机可读载体。