[发明专利]一种调控原癌基因MYB的长链非编码RNA及其应用

说明书

本发明涉及分子生物学，具体涉及一种调控原癌基因MYB的长链非编码RNA及其cDNA。该长链非编码RNA或者其cDNA能够调控MYB基因的表达，可够作为肿瘤分子标志物，或者药物的靶点；还可以调控白血病细胞的增殖，可作为白血病检测的标志物和治疗的靶点。本发明还公开了其重组载体和应用。

技术领域

发明涉及分子生物学和医药领域，具体为一种调控原癌基因MYB的长链非编码RNA。

背景技术

MYB是一种广泛存在于真核生物中，并在进化上高度保守的原癌基因，其主要的生物学效应为调节细胞增殖分化。已有较多的研究表明，MYB在白血病中高度表达，能够作为转录因子，调控癌细胞的增殖、分化、侵袭等过程，是白血病发生的驱动因素。因此，MYB在白血病的检测和治疗中发挥着重要作用。

目前白血病的治疗主要以化疗和骨髓移植为主，化疗副作用大，临床易复发，而骨髓移植费用较高，骨髓来源少，导致白血病的总生存率仍然较低。因此，临床上需要寻找早期而敏感的治疗靶点并探索有效的治疗方法，以更好地降低白血病的死亡率。长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)是指转录本长度大于200个核苷酸，且不具备蛋白质编码功能的一类RNA。研究表明，lncRNA 可以在表观遗传、转录以及转录后水平调控基因的表达。此外，lncRNA还参与多种重要的生命调控过程，包括基因组印记、染色质修饰、RNA代谢、蛋白质功能活性以及染色质重塑等。且已被证实，lncRNA与人类疾病的发生发展密切相关，参与多种肿瘤的发生发展过程，但lncRNA在白血病中的研究仍处于起步阶段。

已有研究发现，远端调控元件在MYB表达调控中具有非常重要的作用，MYB 上游区域的DNA序列可以与MYB启动子形成DNA-loop，并募集转录因子 Hoxa9、PU.1和结构蛋白CTCF和cohesin等远端调控MYB基因的转录。而lncRNA 在白血病的发生和发展过程中可通过多种机制调控细胞增殖、凋亡等过程，发挥促癌或抑癌作用。近年来，虽然关于lncRNA的研究进展迅猛，但是绝大部分的 lncRNA的功能仍然是不清楚的，本发明在MYB上游96k区域的位置发现了转录生成的lncRNA，这种lncRNA对MYB基因的作用以及对白血病的影响未有人研究。

发明内容

本发明旨在针对目前白血病检测和治疗的缺陷和不足，提供一种调控原癌基因MYB的长链非编码RNAMYB-96KS并将其用于调控MYB的表达和肿瘤细胞尤其是白血病细胞的增殖。

所述的长链非编码RNA全长序列可通过RACE技术获取，步骤包括：

(1)获取总RNA作为模板合成RACE第一链cDNA；优选的，从K562 细胞中获取总RNA；

(2)以RACE第一链cDNA为模板，进行第一轮RACE-PCR；所采用的引物为通用引物UPM和5′-末端或3′-末端基因特异性引物；

第一轮RACE-PCR的5′-末端基因特异性引物(5′RACE-GSP)序列为：5′-gtgcctttaaggcaccctgcatacatgat-3′：

第一轮RACE-PCR的3′-末端基因特异性引物(3′RACE-GSP)序列为：5′-gtattgcagacttgggaactcacctcatg-3′；

(3)以第一轮RACE-PCR产物为模板，进行第二轮RACE-PCR，得到cD NA序列；所采用的引物为通用引物UPM和5′-末端或3′-末端基因特异性引物；

第二轮RACE-PCR的5′-末端基因特异性引物5′RACE-NGSP序列为：5′-gcctgttttccccattacatgaggtgagt-3′；

第二轮RACE-PCR的3′-末端基因特异性引物3′RACE-NGSP序列为：5′-cgcctcagtctctcaaagtaatccttcag-3′。