[发明专利]一种检测端粒酶活性的方法

权利要求书

1.一种检测端粒酶活性的方法，其特征在于：该方法采用的纳米荧光探针利用S1和S2作为多孔载体的阻断材料模拟构建智能锁，有效抑制了载体中信号分子的泄露，避免了假阳性信号的产生。

2.一种如权利要求1所述的检测端粒酶活性的方法，其特征在于：所述的S1是能够被端粒酶触发而发生重复扩增反应的端粒酶引物链，S2是能够与扩增产物发生多重杂交反应的互补型长链分子，它由2部分组成，一部分是端粒酶引物链S1，另一部分则是端粒酶引物链的扩增产物的互补链S3。

3.一种如权利要求1所述的检测端粒酶活性的方法，其特征在于：S1和S2的序列从5'端到3'端分别为：AATCCGTCGAGCAGAGTT和AATCCGTCGAGCAGAGTTCCCTAACCCTAA。

4.一种如权利要求1所述的检测端粒酶活性的方法，其特征在于：所述的多孔载体是表面多孔、中空的金纳米载体。

5.一种如权利要求1所述的检测端粒酶活性的方法，其特征在于：所述的信号分子是罗丹明B。

6.一种如权利要求1所述的检测端粒酶活性的方法，其特征在于步骤如下：

(1)2.0mL含有HeLa细胞1.0×10⁷cell/mL的培养液，用pH＝7.4的PBS缓冲液重复清洗三次，随后在2000rpm的转速下离心5min，加入200μL细胞裂解缓冲液进行30min的冰浴，最后在4℃，12000rpm的转速下离心20min获得细胞裂解液；

(2)将上述获取的细胞裂解液逐级稀释，分别获得含有不同细胞数目的溶液，具体细胞数目包括：70、100、200、400、600、800、1000、1100、2000、4000、6000、8000、10000个细胞；

(3)将上述稀释好的细胞裂解液分别与20μL纳米荧光探针溶液，1.0μL EXOⅢ剪切酶和10μL dNTPs混匀，并用PBS缓冲液稀释至100μL；

(4)37℃孵育80min后，采用荧光光谱仪进行检测。