[发明专利]保亭花的组培快速繁殖方法

说明书

本发明公开了一种保亭花的组培快速繁殖方法，选用果实和母株腋芽萌发的茎段作为外植体；将果实处理后进行培养再分割，形成无菌苗切段；将母本植株腋芽萌发形成的茎段培养后进行分割，形成带1～2个节的茎段；将无菌苗切段和茎段转接于增殖培养基上进行增殖培养；可见茎段叶腋处形成丛生芽，将丛生芽分割成单芽，每个单芽再分割成1～2个节的茎段重复进行增殖培养。将幼苗上的叶片进行愈伤组织的诱导和不定芽的分化培养，从而获得不定芽；将茎段叶腋处的丛生芽分割成单芽和叶片上形成的不定芽进行生根培养，最后移栽。本发明成功实现了保亭花的组培快繁，可以短时间内快速培育出大量的试管苗，为该极小种群的恢复提供一条切实可行的繁殖方式。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种保亭花的组培快速繁殖方法。

背景技术

组培快速繁殖技术在加快濒危物种的保护和建立体外基因库方面具有显著的优势(BowesCurtis,1991)。2012年，国家林业局和国家发改委联合印发《全国极小种群野生植物拯救保护工程规划(2011—2015年)》，将极小种群野生植物拯救保护工作推向了全国。在极小种群物种的保护方面，采用组织培养建立种质的离体保存体系非常有必要，该技术已在一些兰科植物的保护中发挥了一定的作用。然而更多的极小种群植物其离体再生体系还有待于建立，保亭花就是其中很有代表性的一个物种。

保亭花(Wenchengia alternifolia C.Y.WuS.Chow)是特产我国海南岛的保亭县、凌水县的一个单种属植物。该属最早由吴征镒和周铉于1965年发表，所依据的是20世纪30年代采自海南的两号标本，由于该属具有互生叶序、总状花序、极联合的花萼、特殊的果柄等特征，在现存唇形科植物中均非常罕见，因此吴征镒根据它建立单型亚科——保亭花亚科(Wenchengioideae)(WuChow,1965)。保亭花属独特的系统位置引起了研究唇形科植物专家的高度重视，但由于材料的缺乏，Ryding(1996)根据哈佛大学标本馆存放的保亭花标本的果实，研究了其果皮的显微结构，揭示保亭花是黄芩亚科的近缘类群。近年来李波(2012)发现了该物种的一个小居群，并通过形态学、解剖学、细胞学及分子系统学等多方面的研究，表明保亭花属为黄芩亚科的基部类群，并与黄芩亚科其它成员存在一系列形态学，解剖学及细胞学的联系，因此支持将保亭花属置于黄芩亚科，而不建议建立单型的保亭花亚科(Li et al,2012)。Li(et al,2014)调查发现该物种的野生群体只有66个个体，其中45株为生殖植株，14株为非生殖植株和7株幼苗。保亭花的幼株比例较低与该物种在石灰岩生境，土壤缺乏，种子易受流水冲刷导致种子萌发率较低有关。因此任何对种群的干扰或栖息地的破坏都可能会引发灭绝，亟待得到保护。该物种在《中国高等植物受威胁物种名录》中被列为极度濒危CR(Critically Endangered)种类(覃海宁等，2017)。

保亭花作为极度濒危物种，尚未有人做过该物种的组培快繁实验，中科院华南植物园李波对该物种进行了迁地保护。因此对此极度濒危，种群规模极小的物种进行组培快繁研究，对于该物种的保护和种群规模的扩大具有重大意义。

参考文献如下：

Bowes BG,Curtis EW.Conservation of the British National BegoniaCollection by micropropagation[J].New Phytologist,1991,119(1):169-181.(BowesBG,Curtis EW.通过微繁殖保护英国收藏的秋海棠[J].新植物学家,1991,119(1):169-181)；

Li B,Xu WX,Tu TY,et al.Phylogenetic position of Wenchengia(Lamiaceae):ataxonomically enigmatic and critically endangered genus[J].Taxon,2012,61:392-401(Li B,Xu WX,Tu TY,et al.保亭花属(唇形科)的系统发育位置：一个分类上神秘和极度濒危的属[J].分类,2012,61:392-401)；