[发明专利]一种兼有抗耐药性和低氧/酯酶双重响应的多功能纳米载体的制备方法和应用

权利要求书

1.一种兼有抗耐药性和低氧/酯酶双重响应的多功能纳米载体的制备方法,其特征在于，包括以下步骤：

1)低氧与酯酶双靶向性AGT抑制剂壳聚糖偶联物CS-COO-AZO-BG的合成方法：

低氧与酯酶双靶向性AGT抑制剂壳聚糖偶联物CS-COO-AZO-BG的结构式为：

称取(E)-4-((3-((2-氨基-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮基)苯甲酸(BZCOH)溶于无水乙醇中，得到浓度为0.25-1mg/mL的BZCOH乙醇溶液；向其中加入4-二甲基氨基吡啶(DMAP)和1,3-二环己基碳二亚胺(DCC)，其中BZCOH、DMAP和DCC的投料摩尔比为1:(1-5):(5-10)，得到混合液A，将混合液A于25-60℃条件下反应4-10h；称取壳聚糖溶于质量浓度为1％的醋酸水溶液中,得到混合液B，按壳聚糖与BZCOH的投入摩尔比为1:5-1:100将混合液B滴加至混合液A中，25-60℃条件下搅拌反应24-72h；然后，将上述反应液置于透析袋中，透析袋截留分子量为3500Da，使用无水乙醇/蒸馏水(v/v)＝3:1-1:1透析，透析时间为12-72h以除去未反应的小分子化合物；将透析液冻干，即得偶联物CS-COO-AZO-BG；

2)一种兼有抗耐药性和低氧/酯酶双重响应的多功能纳米载体CS-COO-AZO-BG NPs的制备：

称取偶联物CS-COO-AZO-BG冻干粉末溶于蒸馏水中得到浓度为5-30mg/mL的偶联物水溶液，冰浴下超声处理5-30min，超声功率设为200-500W；然后，将上述反应液通过混合纤维素滤膜过滤后，真空冷冻干燥12-36h，即得纳米载体CS-COO-AZO-BG NPs；

3)载化疗药物的一种兼有抗耐药性和低氧/酯酶双重响应的多功能抗肿瘤纳米药物CS-COO-AZO-BG/Drug NPs的制备：

将疏水性化疗药物溶于有机溶剂中得到浓度为5-100mg/mL的混合液C，将偶联物CS-COO-AZO-BG冻干粉末溶于蒸馏水中得到浓度为10-35mg/mL的混合液D,将混合液C用注射器均匀地滴加至混合液D中，继续搅拌反应3-10min；然后在冰浴条件下超声处理反应液5-30min，超声功率设为200-400W；接下来，将上述超声后的反应液加至透析袋中，透析袋截留分子量为1000-2000Da，透析液是pH＝7.4的PBS，透析2-6h以除去未包封的药物；最后，将透析袋中的液体冻干，即得包载化疗药物的抗耐药性和低氧/酯酶双重响应的多功能抗肿瘤纳米药物CS-COO-AZO-BG/Drug NPs。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中BZCOH乙醇溶液浓度为0.3-1mg/mL；混合液A中，BZCOH、DMAP和DCC的投料摩尔比为1:(3-5):(5-8)；所述壳聚糖相对分子量为10000-50000Da；混合液B中，壳聚糖与BZCOH的投料摩尔比为1:20-1:80；透析时间为12-36h。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2)中CS-COO-AZO-BG水溶液浓度为10-25mg/mL；超声处理的时间为10-28min；超声功率为250-400W；真空干燥时间为12-24h。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤3)所述的疏水性化疗药物为DNA烷化剂类药物；所述有机溶剂为四氢呋喃、甲醇、无水乙醇中的一种或多种；混合液C的浓度为10-50mg/mL；混合液D的浓度为10-30mg/mL；混合液C和混合液D的反应时间为3-8min；超声处理时间为5-20min，超声功率为300-400W；透析时间为2-4h。

5.按照权利要求1所述制备方法所制备的一种兼有抗耐药性和低氧/酯酶双重响应的多功能纳米载体在制备治疗肿瘤药物中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述肿瘤为脑瘤、骨髓瘤、黑色素瘤、肝癌、肺癌、胃癌、白血病、结肠癌、淋巴癌中的一种或多种。

7.一种低氧与酯酶双靶向性AGT抑制剂壳聚糖偶联物CS-COO-AZO-BG，其结构式为：