[发明专利]一种基于液相芯片检测蜱虫病原体核酸的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种基于液相芯片检测蜱虫病原体核酸的试剂盒，其特征在于，包括PCR引物、Tag探针序列和双结合探针序列和荧光微球，

所述基于液相芯片检测蜱虫病原体核酸的试剂盒的应用方法包括以下步骤：

S1：设计PCR引物、Tag探针序列和双结合探针序列，所述PCR引物用于扩增6种目的基因片段和1种内参基因，所述Tag探针为5’末端进行了Aminolinker C12修饰的针对6种目的基因和内参基因设计的用于标识荧光微球的探针，所述双结合探针序列用于与采用所述PCR引物扩增目的基因片段的扩增产物及标识荧光微球的Tag探针进行特异性杂交；

PCR引物的5’端进行生物素修饰，所述PCR引物包括7对引物， 7对引物序列如下：

Anaplasma上游引物：AGTCCGGRAGAGGATAGCG；

Anaplasma下游引物：Biotin-TTCGCACCTCAGYGTCAG；

Borrelia上游引物：TAATGCTTRTTGGAGAAAATGAC；

Borrelia下游引物：Biotin-GCAACYTCAGCCATACCT；

Babesia上游引物：CAAGAACGAAAGTTAGGGGMT；

Babesia下游引物：Biotin- TGATTTCTCTCAAGSTSCTG；

Borreliella上游引物：CTTGTAGATGAGTCTGCGTCTTATTA；

Borreliella下游引物：Biotin- CTCAGTTCCAGTGTGACCGWTC；

Rickettsia上游引物：ttgtgacggRaggtaacttgt；

Rickettsia下游引物：Biotin- ATTATCGGCAGGAGCATCAA；

TBEV上游引物：GGGCGGTTCTTGTTCTCC；

TBEV下游引物：Biotin- ACACATCACCTCCTTGTCAGACT；

β-globin上游引物：GGCTGCCTATCAGAAAGTGGTG；

β-globin下游引物：Biotin- AGGCAGAATCCAGATGCTCAAG；

所述Tag探针序列如下（5^，-3^，）：

Anaplasma-T：NH2C12-TGATTGTAGTATGTATTGATAAAG；

Borrelia-T：NH2C12-GATTGTAAGATTTGATAAAGTGTA；

Babesia-T：NH2C12-GATTTGAAGATTATTGGTAATGTA；

Borreliella-T：NH2C12-GATTGATTATTGTGATTTGAATTG；

Rickettsia-T：NH2C12-GATTTGATTGTAAAAGATTGTTGA；

TBEV-T：NH2C12-ATTGGTAAATTGGTAAATGAATTG；

β-globin-T：NH2C12-GTAAGTAATGAATGTAAAAGGATT；

所述双结合探针序列如下（5^，-3^，）：

Anaplasma-P：CTTTATCAATACATACTACAATCA AGGAGGAACACCAGTGGCGAAG；

Borrelia-P：TACACTTTATCAAATCTTACAATC TGGGAAGAAGCACCAACAGATTATG；

Babesia-P：TACATTACCAATAATCTTCAAATC TAGKGATTGGAGGTCGTCRKT；

Borreliella-P：CAATTCAAATCACAATAATCAAT CCCTACCAAGRCRATGATAAGTAACCG；

Rickettsia-P：TCAACAATCTTTTACAATCAAATC AACTTGTTGCCTGTTACTATTACTGY；

TBEV-P：CAATTCATTTACCAATTTACCAATCCCTGAGCCACCATCACCCAGACACAGAT；

β-globin-P： AATCCTTTTACATTCATTACTTAC GCCCACAAGTATCACTAAGCTCGC；

S2：液相芯片的制备：步骤S1中Tag探针的荧光微球及步骤S1中所述双结合探针偶联，得到液相芯片；

S3：采用步骤S1中所述PCR引物对目的基因进行扩增，得到扩增产物，再与步骤S2得到的液相芯片进行杂交，得到杂交产物，通过液相芯片检测仪读出检测结果。