[发明专利]一种高活性重组蛋白的制备方法

权利要求书

1.一种高活性重组蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

将重组蛋白的HPLC纯化样品与蛋白溶解液混合，进行溶解处理；

将溶解处理后的样品与复性液混合，进行复性处理；

采用阴离子交换层析柱对复性处理后样品进行纯化，得到高活性重组蛋白；

所述蛋白溶解液包括如下组分：

溶解剂 4～10M

DTT 5～20mM

PB缓冲液 补足至1L；

所述复性液包括如下组分：

PB缓冲液 1L

还原剂 5～40mM。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述溶解剂为尿素和/或盐酸胍；

所述溶解剂为尿素，溶解剂在蛋白溶解液中的浓度为6～10M；

所述溶解剂为盐酸胍，溶解剂在蛋白溶解液中的浓度为4～8M。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述还原剂为DTT和或2-巯基乙醇。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述蛋白溶解液包括如下组分：

溶解剂 6～8M

DTT 10mM

PB缓冲液 补足至1L；

所述复性液包括如下组分：

PB缓冲液 1L

还原剂 20mM。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述PB缓冲液为10～30mM、pH 7.0～8.0的PB缓冲液。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，蛋白溶解液中，PB缓冲液为15～25mM、pH 7.0～7.5的PB缓冲液；

复性液中，PB缓冲液为15～25mM、pH 7.6～8.0的PB缓冲液。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述HPLC纯化样品与所述蛋白溶解液的体积比为1:(5～15)；所述溶解处理的条件为：15～30℃溶解处理1.5～2.5h。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述HPLC纯化样品与所述复性液的体积比为1：(5～10)；所述复性处理的条件为：15～30℃搅拌3～5h，然后0～6℃复性处理20h以上。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述阴离子交换层析柱纯化所用洗脱液包括如下组分：

PB缓冲液 1L

NaCl 0.1～0.3M。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的制备方法，其特征在于，采用阴离子交换层析柱对复性处理后样品进行纯化时，样品的流速为3～7mL/min。