[发明专利]一种能减少三种荧光通道PCR竞争的生殖道PCR体系

说明书

一种能减少三种荧光通道PCR竞争的生殖道PCR体系，涉及分子生物学。所述生殖道PCR体系包括：包含6种生殖道病原体的六套引物与探针、dNTPs、无甘油热启动酶、MgCl₂、冻干保护剂等。所述6种生殖道病原体为沙眼衣原体、淋病奈瑟菌、解脲支原体、人型支原体、生殖支原体、B族链球菌。所述沙眼衣原体和人型支原体的探针采用能降低荧光本底的双淬灭探针，以提高基因竞争双方的弱势一方的PCR扩增效率。可用于对性病感染生殖道病原体导致的不孕不育及孕期感染B族链球菌的检测。使用方便，操作简单，能够满足多种荧光通道竞争要求的灵敏度。

技术领域

本发明涉及分子生物学，尤其是涉及一种能减少三种荧光通道PCR竞争的生殖道PCR体系。

背景技术

不孕症是指一年未采取避孕措施，性生活正常而未能成功妊娠。研究表明，不孕症困扰着全球约16％的育龄夫妇。国内外的调查均表明，生物学因素中的输卵管因素是造成中国不孕症的首要因素。而生殖道病原体的感染是导致不孕不育的主要因素。支原体、衣原体和淋球菌是生殖道感染的主要病原菌，可引起男性尿道炎、女性阴道炎、宫颈炎、盆腔炎及不孕症等。

沙眼衣原体(CT)引起的性传播疾病是全世界近年来主要的导致不孕症的性传播疾病。CT感染的主要病理改变是慢性炎症，感染前期可能无明显临床症状，但是随着感染的发展，会引发组织损伤，后期还可形成瘢痕，对器官的正常功能造成影响。

淋病奈瑟菌(NG)为淋病的病原菌，可造成黏膜上皮的损伤，导致输卵管阻塞、粘连，从而影响黏膜上皮的正常分泌机制，导致不孕。淋球菌性附睾-睾丸炎可导致持续性的少精症、无精症。

感染生殖道的支原体中的主要包括解脲支原体(UU)、人型支原体(MH)和生殖器支原体(MG)三种类型。支原体可在生殖道细胞表面形成黏附，对正常的细胞进行杀伤从而引起子宫内膜、输卵管慢性炎症的发生，输卵管黏膜遭到损伤后，会造成输卵管粘连或阻塞；另外，UU、MH和MG还对输卵管纤毛的运动造成一定的影响，阻碍受精卵的形成，从而导致不孕症的发生。

B族链球菌呈阳性和母婴结局、胎膜早破等现象有密切相关，检测孕妇B族链球菌是保证母婴健康、安全的重要手段。早在20世纪90年代，CDC便制订了B族链球菌的检测、筛查及处理指南，AAP、ACOG提倡怀孕35～37周的孕妇进行B族链球菌的产前筛查，并对阳性者及早干预，把产妇的产褥病发病率及新生儿败血症感染率控制在最低范围内。目前临床用于生殖道感染病原体检测的方法有培养技术、免疫技术和PCR技术等，这些技术在临床诊断中已发挥巨大的作用，但仍存在一些缺点。培养技术繁琐而费时；免疫技术要有特异的抗血清。对于多种荧光通道的荧光PCR体系，相应的引物探针会形成竞争，导致多通道体系的灵敏度下降，也会产生假阳的现象。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术存在的多种荧光通道的荧光PCR体系中，相应的引物探针会形成竞争，导致多通道体系灵敏度下降，产生假阳现象等问题，提供能同时检测生殖道沙眼衣原体、淋病奈瑟菌、解脲支原体、人型支原体、生殖支原体和B族链球菌6种核酸的一种能减少三种荧光通道PCR竞争的生殖道PCR体系。

本发明所述能减少三种荧光通道PCR竞争的生殖道PCR体系包括：包含6种生殖道病原体的六套引物与探针、dNTPs、无甘油热启动酶、MgCl₂、冻干保护剂等。

所述6种生殖道病原体为沙眼衣原体、淋病奈瑟菌、解脲支原体、人型支原体、生殖支原体、B族链球菌；

所述六套引物与探针为：

沙眼衣原体：

上游引物：ACCTTTTTTCGCTGTTTTTGTCTT；

下游引物：AAAGAGAGATAGCAGAGAAATACGGAGT；

探针：TGTCGCTTCTCGCTATCATATCATTCGAGC。