[发明专利]基于链交换扩增的miRNA-208a扩增引物对及其检测试剂盒

权利要求书

1.miRNA-208a等温扩增引物对，其特征在于，所述等温扩增引物对包含一条正向引物和一条反向引物，所述正向引物由正向的5’端侧平衡序列和正向的3’端侧扩增序列组成，所述正向的3’端侧扩增序列与miRNA-208a-3p的5’端侧序列同源；所述反向引物由反向的5’端侧平衡序列和反向的3’端侧扩增序列组成，所述反向的3’端侧扩增序列与miRNA-208a-3p的3’端侧序列互补；所述正向引物序列如SEQ ID NO：1所示；所述反向引物序列如SEQ ID NO：2所示。

2.根据权利要求1所述等温的扩增引物对，其特征在于，所述正向引物和反向引物的工作摩尔比为1:1~ 1:3。

3.权利要求1或2所述的等温扩增引物对在制备miRNA-208a检测试剂盒中应用。

4.一种miRNA-208快速检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的等温扩增引物对。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述等温扩增引物对上标记有特定标记物，可选自生物素、地高辛、FAM、异硫氰酸荧光素、Cy3或Cy5荧光染料中的一种或几种。

6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括等温扩增缓冲液、BstDNA聚合酶、dNTPs、聚乙二醇、甜菜碱、无酶水、阳性对照和阴性对照。

7.根据权利要求4或5或6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括荧光免疫层析试纸条。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光免疫层析试纸条包括底板、吸水纸、硝酸纤维膜、结合垫、样品垫，所述硝酸纤维膜上设有一条包被有二抗的质控线C线，还设有一条与所述质控线C线平行的包被有抗B抗体的检测线T线，所述结合垫包被有荧光微球抗A抗体偶联物，所述抗A抗体和抗B抗体可选自链霉亲和素、生物素、抗地高辛抗体或抗荧光染料抗体，所述抗荧光染料抗体可选自抗FAM抗体、抗FITC抗体、抗Cy3抗体、抗Cy5抗体，所述抗B抗体应选用与抗A抗体不同的抗体。

9.根据权利要求4~8任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述等温扩增引物对中的引物适用工作温度范围为55~70℃，所述等温扩增引物对优选反应温度为61~63℃。