[发明专利]一种肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体及其分泌杂交瘤细胞株和应用

说明书

本发明提供了一种肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体及其分泌杂交瘤细胞株和应用，属于单克隆抗体技术领域。本发明针对肝螺杆菌CdtB蛋白检测空白的问题，用具有良好免疫原性的肝螺杆菌CdtB第19位至273位氨基酸区域经重组表达免疫动物，筛选得到分泌肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株2D9，保藏编号为CCTCCNO：C2021140。杂交瘤细胞株2D9分泌的肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体可特异性结合肝螺杆菌CdtB蛋白，具具有亲和力高、特异性好的特点，且为小鼠IgG1亚型，为利用免疫学检测方法检测或诊断肝螺杆菌的感染提供了基础，为肝螺杆菌相关疾病的研究、新型诊断试剂的研制提供有力的研究基础。

技术领域

本发明属于单克隆抗体技术领域，具体涉及一种肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体及其分泌杂交瘤细胞株和应用。

背景技术

肝螺杆菌(Helicobacter hepaticus,H.hepaticus)是一种小鼠病原体，可在近交系和基因工程小鼠中诱导慢性活动性肝炎、肝细胞癌、结肠炎和炎症性肠病。虽然该菌的自然宿主是鼠类，但近年来，从原发性肝癌患者组织中检测到针对肝螺杆菌16s rRNA的特异性片段，提示着人类肝胆疾病可能与肝螺杆菌感染存在一定的关系。从遗传学上看，肝螺杆菌与人类细菌性病原体幽门螺杆菌和空肠弯曲杆菌密切相关。因此，肝螺杆菌常被用于制备研究人类相关的动物模型，解析其致病机理。

对肝螺杆菌致病机理研究主要集中在外膜蛋白，结构蛋白和毒力因子。已发现多种致病性革兰氏阴性菌可产生细胞致死性肿胀毒素(Cytolethal distending toxin,CDT)，包括弯曲杆菌、大肠杆菌、嗜血杆菌、伤寒沙门氏菌和志贺氏菌，该毒素能通过损伤DNA和阻断细胞周期，最终导致细胞肿胀、死亡。肝螺杆菌CDTs是易感鼠胃肠道持续感染和引起黏膜炎症或肝损伤的必需因子。

肝螺杆菌的细胞致死性肿胀毒素属于AB₂型毒素。AB₂三聚体由一个活性亚基(CdtB)和两个结合亚基(CdtA和CdtC)组成。活性亚基CdtB具有类DNaseI活性，而CdtA和CdtC是将CdtB传递进入靶细胞的结合蛋白。将CdtB转移到细胞核会对DNA产生基因毒性效应，引发DNA断裂，导致细胞周期停止和最终的细胞死亡。同时，作为肝螺杆菌的主要毒力因子，CdtB还可以刺激肠道和肝脏炎症的发生，引发肝纤维化和肝硬化。

对于肝螺杆菌的检测，最常见的方法包括PCR、免疫印迹技术、免疫组化法等。无论采用何种免疫学检测方法，都需要特异、敏感的检测抗体。现在国内外都没有出现肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体的报道。因此，需要制备亲和力、特异性好的单克隆抗体，为肝螺杆菌相关疾病的研究、新型诊断试剂的研制提供有力的研究基础。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体，具有较强的特异性和敏感性，适用于免疫学检测。

本发明的目的还在于提供一种分泌肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

本发明的目的还在于提供一种基于免疫学检测的试剂盒，为肝螺杆菌相关疾病的诊断和检测提供基础。

本发明提供了一种分泌肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株2D9，保藏编号为CCTCC NO：C2021140。

本发明提供了一种肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体，由所述杂交瘤细胞株2D9分泌得到。

优选的，所述肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体为小鼠IgG1亚型。

优选的，所述肝螺杆菌CdtB蛋白单克隆抗体与肝螺杆菌CdtB蛋白特异性结合。

优选的，所述肝螺杆菌CdtB蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

优选的，所述肝螺杆菌CdtB蛋白为利用重组原核表达载体进行重组表达获得的肝螺杆菌CdtB重组蛋白；