[发明专利]一种含有活性肽并具有抗衰老作用的药品或化妆品

权利要求书

1.一种抗衰老的药物，其特征在于：所述药物含有负载有多肽的外泌体，并且是凝胶形式；其中外泌体的制备方法为将骨髓间充质干细胞使用无血清MSC培养基重悬，接种于底面积25 cm²的培养皿中，接种细胞数1×10⁶个，培养基20 ml；细胞增殖到90%时用无菌PBS溶液清洗细胞表面，重复2次，加入20 ml 添加有5mg/L FGF的α-MEM基础培养基在1%O₂、3%CO₂的培养条件下培养3 d后收集培养上清进行外泌体提取；将收集到细胞上清分别装于50 ml离心管中，常温3500 rpm，离心25min，去除细胞及其细胞碎片；收集离心后的上清，过0.22μm的滤过膜除去大的颗粒及囊泡，加入终浓度为5%的5×PEG 6000试剂，4 ℃静置过夜；将过夜静置的PEG 6000细胞上清混合液离心，3 000 rpm离心30 min，可见离心管底及壁上有白色絮状沉淀，将离心管上清弃去，并将离心管倒扣于吸水纸上，风干15min，按照1g:200mL的重量/体积比加入适量PBS重悬，再次5000 rpm离心20 min，弃上清，按照1g:100mL用PBS重悬即获得间充质干细胞外泌体；

所述负载多肽的外泌体的制备方法为，在1mL 50mM海藻糖PBS溶液中分别加入外泌体100μg、1mg/mL SEQ ID NO:1 DYT-4多肽DMSO溶液20μl；混匀后，加入4mm电穿孔皿中，放入电穿孔仪，按照如下反应条件：电压120V，电容155μF，放电时间1ms，放电次数：2次；穿孔后即可将混悬液放入细胞培养箱中孵育1个小时，采用100000g超速离心两次，每次80min，小心弃尽上清，用PBS液重悬沉淀即为负载多肽外泌体；

将所述负载多肽外泌体制备凝胶，所述凝胶的制备方法是按照如下配方采用本领域常规的制备方法来制备：0.65％的丙烯酸(酯)类／C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物，0.05％的EDTA二钠，3％的甘油，3％丁二醇，0．25％PHENONIP，1％负载有多肽的外泌体，4％分子透明质酸钠，然后用氢氧化钾10％溶液调节pH为5.6，余量为水。

2.一种抗衰老的化妆品，其特征在于：所述化妆品含有负载有多肽的外泌体，并且是凝胶形式；其中外泌体的制备方法为将骨髓间充质干细胞使用无血清MSC培养基重悬，接种于底面积25 cm²的培养皿中，接种细胞数1×10⁶个，培养基20 ml；细胞增殖到90%时用无菌PBS溶液清洗细胞表面，重复2次，加入20 ml 添加有5mg/L FGF的α-MEM基础培养基在1%O₂、3%CO₂的培养条件下培养3 d后收集培养上清进行外泌体提取；将收集到细胞上清分别装于50ml离心管中，常温3500 rpm，离心25min，去除细胞及其细胞碎片；收集离心后的上清，过0.22μm的滤过膜除去大的颗粒及囊泡，加入终浓度为5%的5×PEG 6000试剂，4 ℃静置过夜；将过夜静置的PEG 6000细胞上清混合液离心，3 000 rpm离心30 min，可见离心管底及壁上有白色絮状沉淀，将离心管上清弃去，并将离心管倒扣于吸水纸上，风干15min，按照1g:200mL的重量/体积比加入适量PBS重悬，再次5000 rpm离心20 min，弃上清，按照1g:100mL用PBS重悬即获得间充质干细胞外泌体；

所述负载多肽的外泌体的制备方法为，在1mL 50mM海藻糖PBS溶液中分别加入外泌体100μg、1mg/mL SEQ ID NO:1 DYT-4多肽DMSO溶液20μl；混匀后，加入4mm电穿孔皿中，放入电穿孔仪，按照如下反应条件：电压120V，电容155μF，放电时间1ms，放电次数：2次；穿孔后即可将混悬液放入细胞培养箱中孵育1个小时，采用100000g超速离心两次，每次80min，小心弃尽上清，用PBS液重悬沉淀即为负载多肽外泌体；

将所述负载多肽外泌体制备凝胶，所述凝胶的制备方法是按照如下配方采用本领域常规的制备方法来制备：0.65％的丙烯酸(酯)类／C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物，0.05％的EDTA二钠，3％的甘油，3％丁二醇，0．25％PHENONIP，1％负载有多肽的外泌体，4％分子透明质酸钠，然后用氢氧化钾10％溶液调节pH为5.6，余量为水。