[发明专利]一种促进浙贝母鳞茎发生同步化的培养方法

说明书

本公开提供了一种促进浙贝母鳞茎发生同步化的培养方法，旨在解决现有的培养方法同步化率低且生长速度慢的问题。促进浙贝母鳞茎发生同步化的培养方法，包括以下步骤：(1)不定芽诱导：将浙贝母组培苗叶柄切成0.5‑1cm的小段，接种于培养基中，诱导不定芽；(2)成苗培养：不定芽诱导40d后，芽高1‑2cm，将丛生芽从基部纵向切割成带芽小块，转移培养基，促进芽生长成苗；(3)生根培养：成苗培养后，将高为5cm的成苗切割成单株转移培养基进行生根培养；(4)移栽：组培苗基部长出3～8条长1～2cm的不定根后，将生根组培苗从培养瓶中取出，栽种到基质中。本发明的培养方法，生产浙贝母组培苗所用的时间为115天，在促进鳞茎同步化同时可大大缩短培养时间。

技术领域

本公开属于浙贝母组培技术领域，具体涉及一种促进浙贝母鳞茎发生同步化的培养方法。

背景技术

浙贝母(Fritillaria thunbergii Miq.)为百合科贝母属的一种多年生草本植物，鳞茎具有清热化痰止咳，解毒散结消痈等功能。浙贝母以鳞茎繁殖为主，繁殖系数与其他药材的繁殖系数相比处于低水平，生长年限长、种性退化，致使生产效率受到很大的限制。

植物组织培养不受季节时间的限制，可以采用多种器官或者组织建立再生体系，从而达到快速繁殖的目的。利用植物组织培养技术建立高效的组织培养体系，是生产优质种苗、在短期内获得大量种苗供生产应用的主要途径。浙贝母具有较高的商品价值，通过组织培养可快速得到再生浙贝母幼苗，能够克服其种子繁殖与鳞茎繁殖技术上的缺点，具有较大的实用价值。目前针对浙贝母组织培养繁育体系，文献报道较多的是通过鳞茎为外植体诱导愈伤组织后进一步分化，经过多次继代增殖，最后生根成苗，以及在各阶段的培养基中添加多种营养与活性物质。进一步完善优化再生方法，得到繁殖系数高、周期短、成本低的再生体系是浙贝母组培工厂化生产中的研究方向，并为下一步开展浙贝母脱毒苗培育和新品种选育奠定坚实的基础。

发明内容

本公开提供了一种促进浙贝母鳞茎发生同步化的培养方法，旨在解决现有的培养方法同步化率低且生长速度慢的问题。

为了解决上述技术问题，本公开所采用的技术方案为：一种促进浙贝母鳞茎发生同步化的培养方法，包括以下步骤：

(1)不定芽诱导：将浙贝母组培苗叶柄切成0.5-1cm的小段，接种于MS+0.5～1.0mg/L 6-BA+0.1～0.3mg/L NAA+50g/L蔗糖+7g/L琼脂的培养基中，诱导不定芽；

(2)成苗培养：不定芽诱导40d后，芽高1-2cm，将丛生芽从基部纵向切割成带芽小块，转到MS+0.2～0.5mg/L 6-BA+0.1～0.3mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂的培养基中促进芽生长成苗；

(3)生根培养：成苗培养后，将高约为5cm的成苗切割成单株转接于MS+0.1～0.5mg/L NAA+30～60g/L蔗糖+7g/L琼脂的培养基中进行生根培养；

(4)移栽：组培苗基部长出3～8条长1～2cm的不定根后，将生根组培苗从培养瓶中取出，洗去表面的培养基，剪去残叶，栽种到基质中。

进一步改进的方案：所述培养基pH为5.8，且在121℃条件下灭菌20min。

进一步改进的方案：所述步骤(1)中，培养温度均为23±1℃，光照强度为3000～4000Lx，光照时间为12h/d。

进一步改进的方案：所述步骤(2)中，培养温度均为23±1℃，光照强度为3000～4000Lx，光照时间为12h/d。

进一步改进的方案：所述步骤(3)中，培养温度均为23±1℃，光照强度为3000～4000Lx，光照时间为12h/d。

进一步改进的方案：所述步骤(4)中的培养温度为20～25℃，相对湿度为85％以上，光照强度为2000～3000Lx。