[发明专利]从杨梅叶中纯化杨梅黄酮的方法

说明书

本发明公开了一种从杨梅叶中纯化杨梅黄酮的方法，包括如下步骤：将杨梅叶粉碎后用乙醇浸提，得乙醇提取液，所述乙醇提取液中含有叶绿素、杨梅黄酮和杨梅黄酮糖苷；在乙醇提取液中加入蒸馏水和叶绿素酶后进行酶解，从而使叶绿素分解；在酶解液中加入酸性助剂进行酸化反应，使杨梅黄酮糖苷转化为杨梅黄酮；将酸性转化后的提取液旋转蒸发去除乙醇，加入蒸馏水后静置，所得的杨梅黄酮粗提物纯化，得杨梅黄酮。本发明利用叶绿素酶酶解排除叶绿素干扰，进一步联合大孔树脂分离纯化从而获得高纯度(纯度≥95％)的杨梅黄酮。

技术领域

本发明涉及一种从杨梅叶中提取并纯化杨梅黄酮的方法。

背景技术

杨梅黄酮，又名杨梅素、杨梅酮、杨梅树皮素，其化学名为5,7-三羟基-2-(3,4,5-三羟基苯基)-4H-1-苯并呋喃-4-酮，分子式C1₅H₁₀O₈，分子量318.24。杨梅黄酮难溶于水，易溶于甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂。国内外大量研究表明，杨梅黄酮具有抗氧化、降血糖、保肝护肝、抗炎、美白等多种生理功效。美国FDA已批准将杨梅黄酮应用于化妆品、食品、保健品和医药领域。

杨梅黄酮广泛存在于多种植物叶中，但是杨梅黄酮在植物叶中含量较低。据文献报道，藤茶、显齿蛇葡萄、杨梅等植物叶片的含量较高，关于其分离纯化杨梅黄酮的专利已有公开。但是由于植物叶片中的叶绿素和杨梅黄酮溶解性质相近，叶绿素严重影响杨梅黄酮的提取纯化。

专利CN200510034824公开了一种从显齿蛇葡萄茎叶中提取杨梅黄酮的方法，采用乙醇水溶液和中等极性溶液进行二次提取，并利用聚酰胺和大孔树脂进行纯化，获得纯度80％的杨梅黄酮；该技术不能完全排除叶绿素的干扰，导致制备的杨梅黄酮纯度较低。专利CN200610019693公开了一种从藤茶及其它葡萄科蛇葡萄属植物中提取制备杨梅素的方法，采用沸水提取杨梅黄酮，排除叶绿素的干扰，经浓缩、结晶制得高纯度杨梅黄酮；但是杨梅黄酮高温下极不稳定，导致得率严重下降，而且杨梅黄酮在热水中溶解度较低，需消耗大量的水和电能。专利CN102040576公开了一种从杨梅枝叶提取杨梅素的方法，采用酶解杨梅枝叶，所用酶为纤维素酶、β葡聚酶、苦杏仁酶、淀粉酶中的一种或多种，95％乙醇水溶液提取，然后利用高速逆流色谱进行纯化同时去除叶绿素，获得高纯度杨梅黄酮；但是该技术所采用的高速逆流色谱纯化效率低、成本高，只适用于实验室研究，不适用于规模化批量生产，而且大量消耗有机溶剂，污染环境。因此，亟需开发新的技术排除叶绿素对从植物叶中提取纯化杨梅黄酮的干扰。

分解叶绿素的方法有多种，包括光、酸、碱、氧、氧化剂等，但是这些方法产生的分解产物溶解性与叶绿素性质较相近，无法利用这些方法去除叶绿素的不利影响。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种从杨梅叶中纯化杨梅黄酮的方法，该方法针对从植物叶(特别是杨梅叶)中分离纯化杨梅黄酮易受叶绿素干扰的问题，利用叶绿素酶酶解排除叶绿素干扰，进一步联合大孔树脂分离纯化从而获得高纯度(纯度≥95％)的杨梅黄酮。

为解决上述技术问题，本发明提供一种从杨梅叶中纯化杨梅黄酮的方法，包括如下步骤：

1)、提取：

将杨梅叶粉碎后用乙醇浸提，得乙醇提取液，所述乙醇提取液中含有叶绿素、杨梅黄酮和杨梅黄酮糖苷；

2)、叶绿素分解：

在步骤1)所得的乙醇提取液中加入蒸馏水和叶绿素酶，形成反应体系，所述反应体系中叶绿素酶含量50～200U/ml；

反应体系于30～60℃(优选40～60℃)酶解1～2小时，从而使叶绿素分解，得酶解液；

叶绿素分解为完全分解，获得脱植基叶绿素和叶绿醇(植醇)

3)、酸性转化：