[发明专利]一种脐带间充质干细胞程序降温方法

说明书

本发明提供了一种脐带间充质干细胞程序降温方法，包括：将脐带间充质干细胞与含有10％DMSO的完全培养基混匀，形成混合溶液；将混合溶液装入冻存管；对冻存管进行预冷；将冻存管转移至所述容置空间；对程序降温仪的容置空间进行预冷；对所述容置空间进行降温；对所述容置空间进行升温；对所述容置空间进行降温；完成对装有混合溶液的冻存管的程序降温；将冻存管转移至气相液氮罐储存。本发明的有益效果在于：提供了一种降温速率及降温控制点设置合理的方法，能够对脐带间充质干细胞在液态冷冻为固态时的散热和回温进行精准的主动干预和控制，有效避免了冻存过程出现冰晶损伤或溶液损伤的情况，能够保证复苏细胞活率的同时，大大减少了降温时间。

技术领域

本发明涉及细胞冻存技术领域，尤其是指一种脐带间充质干细胞程序降温方法。

背景技术

脐带间充质干细胞是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，具有较高的分化潜能，可向多个方向进行分化，具有来源充足、易于获取、免疫原性低、无社会理论争议等方面优点，具有更好的临床应用前景。

科学家早已证明，细胞可以在低温环境中长期储存，但直接将细胞置于低温环境中会对细胞造成冰晶或溶质的损伤，这种损伤是不可逆的，会影响细胞复苏后的活性。经过进一步研究发现，将加入冷冻保护剂的细胞按照一定速率降温可以显著降低冰晶或溶质损伤，提高细胞的复苏活率。目前常用液氮法、程序降温盒法或程序降温仪法对细胞进行降温。但目前利用程序降温仪降温大多数是针对脐带血造血干细胞的降温程序，且程序不尽相同。

目前技术不足：

1、使用液氮法降温，直接将细胞保存于-196℃的液氮中，细胞直接接触液氮导致急剧降温，使细胞内产生大量冰晶，冰晶体积增大且多为六边形，刺破细胞膜和细胞器，造成细胞严重损伤；

2、使用程序降温盒降温，需频繁添加异丙醇，异丙醇属于有毒溶剂且极易挥发，长期使用会对环境造成污染且威胁操作人员人身安全。另外由于程序降温盒按1℃/min降温速率降温，同时受环境等因素影响，根据厂家提供的降温曲线，单次降温时间最少200min。

而且使用程序降温仪进行的降温方式中，目前没有单独针对脐带间充质干细胞的降温程序，通常使用脐带血造血干细胞的降温程序对其进行降温，并且程序各不相同。由于脐带间充质干细胞与脐带血造血干细胞的直径、冻存液成分等差异较大，因此急需一种专门针对脐带间充质干细胞的降温程序，以更好满足其冻存要求。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：针对现有技术的不足，提供一种安全可靠、细胞复苏活率高的脐带间充质干细胞程序降温方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种脐带间充质干细胞程序降温方法，包括：

S1、将脐带间充质干细胞与含有10％DMSO的完全培养基混匀，形成混合溶液；

S2、将混合溶液装入冻存管；

S3、对装有混合溶液的冻存管进行预冷；

S4、将装有混合溶液的冻存管转移至所述容置空间；

S5、对程序降温仪的容置空间进行预冷；

S6、对所述容置空间进行降温；

S7、对所述容置空间进行升温；

S8、对所述容置空间进行降温；

S9、完成对装有混合溶液的冻存管的程序降温；

S10、将完成降温的装有混合溶液的冻存管转移至气相液氮罐储存。

进一步的，在步骤S3和步骤S5之中，预冷温度为3-5℃。

进一步的，在步骤S3之中，预冷时间为3-60min。