[发明专利]一种胞外转运维生素D3前体角鲨烯的酿酒酵母菌株构建及其应用有效
| 申请号： | 202110926222.6 | 申请日： | 2021-08-12 |
| 公开（公告）号： | CN113684141B | 公开（公告）日： | 2023-08-25 |
| 发明（设计）人： | 刘龙;陈坚;吕雪芹;堵国成;李江华;刘延峰;刘家恒;金柯 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/81;C12N15/53;C12N15/61;C12N15/54;C12N15/31;C12P5/02;C12R1/865 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 赵巧娜 |
| 地址： | 214000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 外转 维生素 d3 前体角鲨烯 酿酒 酵母 菌株 构建 及其 应用 | ||
1.一种重组酿酒酵母，其特征在于，所述重组酿酒酵母强化表达了3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶tHMG1、异戊烯基焦磷酸异构酶IDI、法尼基焦磷酸合酶ERG20、内质网大小调节因子的相关基因INO2、Pdr5蛋白和Osh3蛋白；并且敲除了ROX1基因；所述tHMG1的Gene ID为42650、所述IDI的Gene ID为 855986、所述ERG20的Gene ID为 853272、所述INO2的GeneID为 851701、所述ROX1的Gene ID为 856178、所述Pdr5蛋白的Gene ID为 854324、所述Osh3蛋白的Gene ID为 856472。
2.如权利要求1所述的重组酿酒酵母，其特征在于，所述重组酿酒酵母通过PGPD启动子强化表达tHMG1，通过PPGK1启动子强化表达INO2，通过PTEF1启动子强化表达ERG20和IDI，通过P TDH3启动子强化表达Pdr5，通过PTEF2启动子强化表达Osh3。
3.如权利要求1或2所述的重组酿酒酵母，其特征在于，以酿酒酵母BY 4741为出发菌株。
4.一种制备角鲨烯的方法，其特征在于，采用权利要求1~3任一项所述的重组酿酒酵母发酵制备得到。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法为，将重组酿酒酵母接种至种子培养基，制备得到种子液，将制备得到的种子液以2%~4%的接种量接入发酵培养基中，发酵培养，制备得到角鲨烯。
6.如权利要求4或5所述的方法，其特征在于，将所述的重组酿酒酵母接种至种子培养基中，于28~32℃，200~220rpm条件下，培养16-24 h，得到种子液。
7.一种提高酿酒酵母胞外分泌角鲨烯的方法，其特征在于，所述方法为：在酿酒酵母中强化表达3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶tHMG1、异戊烯基焦磷酸异构酶IDI、法尼基焦磷酸合酶ERG20、内质网大小调节因子的相关基因INO2、Pdr5蛋白和Osh3蛋白；并且敲除酿酒酵母中的ROX1基因；所述tHMG1的Gene ID为42650、所述IDI的Gene ID为 855986、所述ERG20的Gene ID为 853272、所述INO2的Gene ID为 851701、所述ROX1的Gene ID为856178、所述Pdr5蛋白的Gene ID为 854324、所述Osh3蛋白的Gene ID为 856472。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，通过PGPD启动子强化表达tHMG1，通过PPGK1启动子强化表达INO2，通过PTEF1启动子强化表达ERG20和IDI，通过P TDH3启动子强化表达Pdr5，通过PTEF2启动子强化表达Osh3。
9.权利要求1~3任一所述的重组酿酒酵母，或权利要求4~8任一项所述的方法在制备含有角鲨烯产品中的应用。
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