[发明专利]鱼卵提取物及其应用

说明书

本发明涉及多肽领域，特别涉及鱼卵提取物及其应用。本发明提供的淡水鱼卵提取物和海水鱼卵提取物的原液及不同组分(5‑10kDa、5kDa)均具有DPPH自由基清除活性，表明鱼卵提取物具有一定程度的体外抗氧化作用。鱼卵提取物可以抑制乳腺癌细胞MCF‑7的增殖，诱导MCF‑7细胞凋亡，如凋亡形态学改变、Annexin V/PI阳性表达等；鱼卵提取物处理细胞24h后可见MCF‑7细胞内活性氧和超氧化物的产生和线粒体去极化。结果表明，鱼卵提取物可能具有以凋亡为基础的抗乳腺癌的治疗潜力。

技术领域

本发明涉及多肽领域，特别涉及鱼卵提取物及其应用。

背景技术

根据粮农组织(Food and Agriculture Organization,FAO)的数据，水产养殖占全球产量的90％，2015年的全球总捕捞量已达0.93亿吨。鱼类加工会产生超过60％的副产物，如鱼鳞、鱼骨、鱼头、鱼皮、鱼油、内脏和鱼卵等，这些鱼类副产物多会作为废物丢弃，而没有被充分开发利用，只有40％的鱼类产品供人类消费。这些副产物中含有大量富含蛋白质的物质，通常被加工成低市场价值的产品，如动物饲料、鱼粉和肥料等。在这些鱼类副产物中，鱼卵产量巨大，尤其是在产卵季节时期，产出的鱼卵数量约占总体重的25％～30％，是一种重要的鱼产品加工副产物。鱼卵，又称鱼子，是存在于雌鱼卵巢膜中，雌鱼未受精的卵子，其中富含蛋白质、多不饱和脂肪酸、矿物质、维生素和胆固醇等营养物质，其中蛋白含量为16.6％～28.2％，鱼卵被认为是优质蛋白的重要来源。因鱼卵中所含营养物质丰富，鱼卵有很大的开发空间和潜在利用价值。

在食用方面，鱼卵有很高的营养价值，目前鱼卵加工制成的鱼子酱是国内外市场上畅销的高档食品。鱼子酱是一种的低脂肪、高蛋白食品，必需氨基酸所占比例较高，且富含各种不饱和脂肪酸和矿物质。鱼子酱的化学成分因鱼的种类、鱼卵的成熟度、产地等条件而异，最广为人知、价值最高的鱼子酱是由里海捕捞的鲟鱼制成的。此外，鱼卵还应用于化妆品行业，鱼子酱可作为活力营养的有效来源，尤其是来自里海的白鲟鱼鱼子精华，富含蛋白质、维他命和多重营养成分，能有效促进肌肤胶原蛋白和弹性纤维的再生，提升细胞的自我修复能力，1987年，La Prairie推出了鱼子精华护肤系列，是化妆品界第一个运用珍稀鱼子酱的品牌。其它护肤品牌也陆续推出了鱼子护肤系列产品，如Pevonia Botanica、BestCare和施肽魅尔等品牌。

但是目前鱼卵作为一种重要的鱼类加工副产物，并没有得到充分的开发利用。鱼卵除作为鱼子酱应用于食品和化妆品中外，鱼卵蛋白中可提取得到具有生物学活性的肽类，如抗氧化肽、抗高血压肽、抗肿瘤肽和抗菌肽等，这些生物活性肽可作为促进人类健康和预防疾病的功能性成分应用于食品药品中。目前关于鱼卵蛋白中所提取的鱼卵小分子多肽多为抗氧化作用、抗菌作用以及免疫调节作用，而鱼卵所涉及的抗肿瘤作用的研究较少。因此，分析鱼卵蛋白提取物的基本特征，探究鱼卵提取物对人乳腺癌细胞MCF-7的抗增殖作用及凋亡机制具有重要的现实意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了鱼卵提取物及其应用。其中，淡水鱼卵提取物和海水鱼卵提取物的组分5kDa的DPPH自由基清除能力均高于组分5-10kDa；高浓度的淡水鱼卵提取物(150-400μg/ml)能显著抑制MCF-7细胞增殖，其抑制程度呈现剂量依赖性。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了鱼卵提取物，其制备方法包括如下步骤：

步骤1：收集鱼卵细胞；

步骤2：取鱼卵细胞依次经洗净、细胞匀浆、冻融、沉淀、收集上清液、截留除杂；所述截留除杂的截留分子量小于10kDa；

步骤3：再经截留分子量为5kDa的超滤膜分级分离，收集5kDa的鱼卵提取物和/或5～10kDa(不包括10kDa)的鱼卵提取物；

所述鱼卵提取物包括淡水鱼卵提取物和/或海水鱼卵提取物；