[发明专利]白皮衫醇的生物催化合成方法在审
| 申请号： | 202110924734.9 | 申请日： | 2021-08-12 |
| 公开（公告）号： | CN113897402A | 公开（公告）日： | 2022-01-07 |
| 发明（设计）人： | 赵云现;杨志彬;张中伟;胡江林;田俊波;赵凯 | 申请（专利权）人： | 河北维达康生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12P7/22 | 分类号： | C12P7/22;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 湖北武汉永嘉专利代理有限公司 42102 | 代理人： | 乔宇 |
| 地址： | 072154 河北*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 白皮衫醇 生物 催化 合成 方法 | ||
1.一种生物催化合成白皮衫醇的方法，其特征在于：所述白皮衫醇的结构式为：
合成方法为：
以白藜芦醇为底物通过HpaBC酶体系合成，所述的HpaBC酶体系由能够表达HpaB和HpaC基因，生成HpaB和HpaC酶的重组菌提供，所述HpaC酶基因序列如SEQ ID No.3所示。
2.根据权利要求1或权2所述的方法，其特征在于：HpaB酶基因序列如SEQ ID No.1所示。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述重组菌是将下述表达载体转化到宿主细胞得到的，所述的表达载体为：pACYCDuet-HpaBC2(rbs)，其中：HpaBC2(rbs)的基因序列如SEQ ID No.4所示,第1564bp-1583bp为rbs序列，或为pETDuet-HpaB+pRSFDuet-HpaC2，pETDuet-HpaB+pRSFDuet-HpaC2构建重组菌为双质粒表达，通过将pETDuet-HpaB和pRSFDuet-HpaC2两个质粒同时转入一个感受态细胞中构建重组菌。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：将底物白藜芦醇溶解在2-羟丙基-β-环糊精中，加入重组菌发酵液，OD600范围10-30，生物合成白皮衫醇。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述反应体系还包括磷酸盐缓冲液。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：反应体系中底物终浓度为0.1～80mM；磷酸盐缓冲液为磷酸钾缓冲液或者磷酸钠缓冲液，浓度为0.1～0.2M，pH为7.0-7.5。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述反应温度为20～35℃，反应震荡转速为150～300rpm，反应时间为0.5～25h。
8.生物催化合成白皮衫醇的表达载体，其特征在于：其为pACYCDuet-HpaBC2(rbs)，其中：HpaBC2(rbs)的基因序列如SEQ ID No.4所示，第1564bp-1583bp为rbs序列，或为pETDuet-HpaB+pRSFDuet-HpaC2，pETDuet-HpaB+pRSFDuet-HpaC2构建重组菌为双质粒表达，通过将pETDuet-HpaB和pRSFDuet-HpaC2两个质粒同时转入一个感受态细胞中构建重组菌。
9.生物催化合成白皮衫醇的重组菌，其是将权9所述的表达载体转化到宿主细胞得到的。
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