[发明专利]一种抗FcRn抗体或其抗原结合片段生物学活性的检测方法

权利要求书

1.一种抗FcRn抗体或其抗原结合片段生物学活性的测定方法，其包括以下步骤：

1)包被捕获抗体：酶标板中加入anti-His捕获抗体工作液，捕获抗体稀释比例为1：1500～1：3000，2～8℃孵育；

2)封闭及结合抗原蛋白：加入2％BSA-PBS封闭液和1～3μg/ml FcRn-His蛋白，pH7.0～8.0，室温封闭；

3)洗板：使用pH5.5～6.5的PBST溶液洗板；

4)参考品及供试品稀释：根据参考品和供试品的标示浓度进行连续梯度稀释，获得至少5个浓度点，其中所述参考品与供试品为抗FcRn抗体或其抗原结合片段，所述抗FcRn抗体或其抗原结合片段包含抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述VH的HCDR1、HCDR2、HCDR3分别含有SEQ ID NO：180所示的重链的HCDR1、HCDR2、HCDR3，所述VL的LCDR1、LCDR2、LCDR3分别含有SEQ ID NO：181所示的轻链的LCDR1、LCDR2、LCDR3；

5)加样：依次加入步骤4)中系列梯度浓度的参考品及供试品，再分别加入0.5～2.0μg/ml的Biotin-IgG工作液和稀释比例为1：5000～1：10000的SA-HRP工作液，混合，孵育90min～150min；

6)洗板：重复步骤3)；

7)显色：加入TMB，室温避光显色后终止反应；

8)读数：使用酶标仪读板，记录450nm下OD值；

9)曲线拟合：对样品浓度和OD值使用四参数方程拟合，确定供试品的生物学活性。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤1)中的anti-His捕获抗体工作液稀释比例为1：2000。

3.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述步骤2)中的FcRn-His蛋白的终浓度为2μg/ml，pH7.4。

4.根据权利要求3所述的测定方法，其特征在于，所述步骤3)中的PBST溶液pH为6.0。

5.根据权利要求4所述的测定方法，其特征在于，所述步骤4)中的样品稀释液为pH6.01％BSA-PBST溶液，先将参考品和供试品分别稀释至浓度为300μg/ml，再将样品向下4倍倍比梯度稀释10个稀释度。

6.根据权利要求5所述的测定方法，其特征在于，所述步骤5)中的Biotin-IgG工作液浓度为1.5μg/ml，SA-HRP工作液稀释比例为1：8000，孵育时间为120min。

7.根据权利要求6所述的测定方法，其特征在于，所述步骤7)中的终止反应为每孔加入100μl的1M H₂SO₄。

8.根据权利要求7所述的测定方法，其特征在于，所述步骤9)中的曲线拟合是利用酶标仪自带软件SoftMax Pro Gxp的四参数回归对浓度和OD值进行曲线拟合，得到参考品和供试品的半效量浓度IC₅₀。

9.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述抗FcRn抗体或抗原结合片段包含抗体重链可变区和轻链可变区，其中：所述重链可变区包含序列分别如SEQ ID NO：133、SEQID NO：170和SEQ ID NO：40所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含序列分别如SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：42和SEQ ID NO：43所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。

10.根据权利要求9所述的测定方法，其特征在于，所述抗FcRn抗体或其抗原结合片段的重链可变区序列如SEQ ID NO：169所示，和所述轻链可变区序列如SEQ ID NO：167所示。