[发明专利]一种LncRNA TUG1靶向调控hsa-miR-4638-3p的方法

说明书

本发明涉及一种LncRNATUG1靶向调控hsa‑miR‑4638‑3p的方法，涉及生物技术领域。本发明的方法包括：步骤1、野生型或者突变型结合位点载体构建；步骤2、采用阳离子脂质体法进行细胞转染；步骤3、对步骤2获得的样品进行Luciferase活性检测。本发明采用萤火虫/海肾双荧光素酶报告系统进行靶标验证，以确定LncRNATUG1与hsa‑miR‑4638‑3p基因存在确切的靶标关系，该方法确定了LncRNATUG1和hsa‑miR‑4638‑3p的靶向调控关系，为进一步研究它们在蒽环类药物心脏毒性作用及分子机制奠定了实验基础。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种LncRNA TUG1靶向调控hsa-miR-4638-3p的方法。

背景技术

目前人类平均寿命逐年增加，但癌症对人类的威胁日益突出，成为危害人类生命安全的重要疾病之一。随着医疗技术的提高、抗肿瘤药物研究的不断发展及肿瘤综合诊治水平的提高，多种肿瘤以慢性病模式长期存在，肿瘤患者生存期延长的同时，抗肿瘤治疗所引起的心血管毒性也与日俱增，尤以蒽环类药物为代表。从长期来看，心血管疾病导致的死亡风险超过了多种肿瘤复发的风险；高龄、合并多种疾病以及需要长期或强化治疗的患者，心血管的毒性风险增加。

lncRNA是一类长度大于200bp且不编码蛋白质的RNA分子，由于功能和种类的不明确，长期以来被认为是不具蛋白编码能力的无功能序列而未受到重视。然而，近年来的研究发现，lncRNA能够在转录、转录后和翻译等水平调控基因表达从而参与细胞的发育、分化、生长及凋亡等生物学过程。并且，越来越多的研究表明lncRNA在心脏发育和功能维持中具有重要作用。

牛磺酸调节基因1(taurine up-regμLated gene 1，TUG1)是一种在小鼠视网膜中发现的lncRNA，定位在22q12.2染色体上，参与血管生成、细胞耐药等过程，还与人体肿瘤发生有关在人体正常细胞功能维持以及疾病发生过程中发挥关键作用。TUG1可调节细胞凋亡，抑制某些细胞系统的凋亡，如β细胞、膀胱癌细胞和肝细胞癌，但在其他细胞如晶状体上皮细胞、神经元和胶质瘤中促进凋亡。但在受到炎症刺激的H9c2心肌细胞中，TUG1抑制细胞凋亡和炎症反应，而在缺氧条件下，TUG1促进细胞凋亡，加重缺氧所致的损伤，提示TUG 1的双重作用与细胞类型和应激刺激有关。那么TUG1是否也可以通过作用于心肌细胞中或蒽环类药物心肌损伤中的特定miRNAs来调节细胞死亡，TUG1参与蒽环类药物心血管毒性的具体分子生物学机制仍有待进一步深入研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种LncRNA TUG1靶向调控hsa-miR-4638-3p的方法，该方法确定了LncRNA TUG1和hsa-miR-4638-3p的靶向调控关系，为进一步研究它们在蒽环类药物心脏毒性作用及分子机制奠定了实验基础。

为了实现上述目的，本发明的技术方案具体如下：

本发明提供一种LncRNA TUG1靶向调控hsa-miR-4638-3p的方法，包括以下步骤：

步骤1、野生型TUG1双报告载体构建；

或者突变预测Hsa-miR-4638-3p第一结合位点载体构建；

或者突变预测Hsa-miR-4638-3p第二结合位点载体构建；

或者双突变预测Hsa-miR-4638-3p结合位点载体构建；

第一结合位点的序列为：tgtccagg；

第一结合位点突变后的序列为：gagttcaa；

第二结合位点的序列为：tgtccag；

第二结合位点突变后的序列为：gagttca；

步骤2、microRNA与质粒共转染细胞