[发明专利]酶组合物及其在柚皮素生物合成中的应用

权利要求书

1.酶组合物，其由查尔酮合成酶和查尔酮异构酶样蛋白组成；其中，

所述查尔酮合成酶选自大豆GmCHS、苹果MdCHS、金丝桃HaCHS、矮牵牛PhCHS、高粱SbCHS、灯盏花EbCHS中至少一种；

所述查尔酮异构酶样蛋白选自苹果MdCHIL、矮牵牛PhCHIL、大豆GmCHIL、拟南芥AtCHIL中至少一种。

2.根据权利要求1所述的酶组合物，其特征在于，

由PhCHS和PhCHIL组成；

或由PhCHS和MdCHIL组成；

或由PhCHS和GmCHIL组成；

或由SbCHS和PhCHIL组成；

或由SbCHS和MdCHIL组成；

或由SbCHS和GmCHIL组成；

或由EbCHS和PhCHIL组成；

或由EbCHS和MdCHIL组成；

或由EbCHS和GmCHIL组成；

或由EbCHS和AtCHIL组成。

3.表达权利要求1或2所述酶组合物的菌株。

4.根据权利要求3所述的菌株，其特征在于，其宿主为大肠杆菌。

5.根据权利要求3所述的菌株，其特征在于，所述菌株中转化含有编码权利要求1或2所述酶组合物中查尔酮合成酶和/或查尔酮异构酶样蛋白的核酸的质粒载体；

编码大豆GmCHS的核酸的序列如SEQ ID NO:3所示；

编码苹果MdCHS的核酸的序列如SEQ ID NO:4所示；

编码金丝桃HaCHS的核酸的序列如SEQ ID NO:5所示；

编码矮牵牛PhCHS的核酸的序列如SEQ ID NO:6所示；

编码高粱SbCHS的核酸的序列如SEQ ID NO:7所示；

编码灯盏花EbCHS的核酸的序列如SEQ ID NO:8所示；

编码苹果MdCHIL的核酸的序列如SEQ ID NO:9所示；

编码矮牵牛PhCHIL的核酸的序列如SEQ ID NO:10所示；

编码大豆GmCHIL的核酸的序列如SEQ ID NO:11所示；

编码拟南芥AtCHIL的核酸的序列如SEQ ID NO:12所示。

6.权利要求1或2所述的酶组合物、权利要求3～5任一项所述的菌株，或者权利要求3～5任一项所述的菌株的培养物在柚皮素生物合成中的应用。

7.柚皮素的生物合成方法，其包括：在含有对香豆酸的培养液中接种权利要求3～5任一项所述的菌株，诱导、发酵后获得含有柚皮素的培养物。

8.根据权利要求8所述的生物合成方法，其特征在于，所述含有对香豆酸的培养液中，培养液为M9发酵培养基，所述对香豆酸的浓度为200mg/L。

9.根据权利要求8所述的生物合成方法，其特征在于，所述含有对香豆酸的培养液中还含有IPTG，所述IPTG的浓度为0.1mM。