[发明专利]基于RSV F蛋白融合前特异性抗体的双抗体夹心ELISA方法及应用

说明书

本发明涉及病毒检测技术领域，具体涉及一种基于RSV F蛋白融合前特异性抗体的双抗体夹心ELISA方法及应用，该双抗体夹心ELISA方法可以更为准确地检测RSV病毒滴度，同时提供直观数据，其分别选择融合前特异性抗体AM14作为包被抗体，选择D25作为检测抗体，包被抗体浓度为1000ng/孔，检测抗体稀释比例为1:3000。本发明建立的双抗体夹心ELISA方法与人轮状病毒、人3型副流感病毒以及牛血清均无交叉反应，特异性良好。本发明用该方法对不同稀释倍数的RSV病毒进行多次重复试验，结果证明该方法CV＜10%。本发明重复性、广谱性、灵敏度良好，具有易操作，周期短的特点。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，具体涉及一种基于RSV F蛋白融合前特异性抗体的双抗体夹心ELISA方法及应用。

背景技术

呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus ,RSV)是一种引起婴幼儿、老年人及免疫缺陷者呼吸道严重感染的病原体，发病率高，流行范围广。因目前没有针对RSV感染的特异性预防措施，疫苗研发是当前的迫切需求。在疫苗研发过程中，病毒滴度检测是评估新的疫苗候选株感染力和毒力的重要工具。

目前，RSV病毒滴度的常用检测方法有CCID50,噬斑法、免疫荧光检测法、ELISA方法、RT-PCR等，每种方法都有自身的优缺点，RT-PCR方法出现假阳性的概率较高，其他试验需要专业的人员对病毒引起的细胞病变进行准确地判断，ELISA方法作为检测抗原的一种常用方法，易操作、周期短。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于RSV F蛋白融合前特异性抗体的双抗体夹心ELISA方法及应用，为实验室RSV病毒滴度检测提供了一种更精确、高效的检测方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

基于RSV F蛋白融合前特异性抗体的双抗体夹心ELISA方法，选择融合前特异性抗体AM14作为包被抗体、融合前特异性抗体D25作为检测抗体检测RSV滴度。其中，所述包被抗体AM14浓度为1000ng/孔，检测抗体D25稀释比例为1:3000。

本发明所述的基于RSV F蛋白融合前特异性抗体的双抗体夹心ELISA方法可以准确测定RSV滴度，同时提供直观数据，可用于不同型别RSV病毒滴度的检测。

本发明建立的双抗体夹心ELISA方法与人轮状病毒、人3型副流感病毒、牛血清无交叉反应，特异性良好。本发明用该方法对不同稀释倍数的RSV病毒进行多次重复试验，结果证明该方法CV＜10%；；用该方法检测RSV A，B不同亚型，均具有较高的灵敏度，证明本发明可以检测不同型别RSV病毒滴度。本发明也可以应用于重组RSV F蛋白的测定。

与CCID₅₀比较，本发明建立的双抗体夹心ELISA方法具有更高的检测灵敏度。本发明建立的双抗体夹心ELISA方法具有良好的重复性、广谱性和灵敏度，为实验室测定RSV病毒滴度提供了一种高效、便捷的方法。

附图说明

图1为不同包被抗体的双抗体夹心ELISA测定RSV滴度结果；

图2 为不同浓度包被抗体的双抗体夹心ELISA测定RSV滴度结果：图中: A: 125ng/孔；B: 250 ng/孔；C: 500 ng/孔；D: 1000 ng/孔；

图3 为不同浓度检测抗体的双抗体夹心ELISA测定RSV滴度结果：图中： A:1:1000；B:1:2000；C:3000；D:4000；

图4为双抗体夹心ELISA方法特异性验证结果：图中：1： B亚型RSV；2：人轮状病毒G1型；3：人3型副流感病毒；4：牛血清；5：阴性对照；

图5为双抗体夹心ELISA方法广谱性试验结果：

图中：1：B亚型RSV；2：A亚型RSV；3：重组RSV F蛋白；4：阴性对照。

具体实施方式