[发明专利]一种用于AAV9 ELISA定量检测的单克隆抗体和试剂盒

说明书

本发明提供了一种用于AAV9 ELISA定量检测的单克隆抗体和试剂盒，涉及抗体工程技术领域。本发明针对目前应用较为广泛的AAV9载体，制备了特异性的鼠单克隆抗体，并建立了双抗体夹心ELISA检测方法，该方法操作简便，具有较高的特异性和灵敏度，可用于AAV9的外壳鉴定及定量检测。

技术领域

本发明属于抗体工程技术领域，具体涉及一种用于AAV9 ELISA定量检测的单克隆抗体和试剂盒。

背景技术

腺相关病毒（AAV）是目前发现的一类结构最简单、无包膜的单链DNA缺陷型病毒，是细小病毒(parvovirus)家族一员。AAV具有20面体结构，直径大约为22nm，病毒基因组长度只有约4.7kb。目前发现AAV的基因型有200多种，根据衣壳蛋白Cap的差异可分为不同的血清型，在人类中共发现AAV1~AAV11、DJ等12 种血清型，不同血清型AAV对不同的组织和细胞有不同的感染效率。

重组腺相关病毒载体(rAAV) 源于非致病的野生型腺相关病毒，由于其安全性好、宿主细胞范围广(分裂和非分裂细胞)、免疫原性低，在体内表达外源基因时间长，表达效率高并可规模化生产等诸多优点，使rAAV成为用于基因治疗领域的一个非常有前景的工具载体。迄今为止，已有许多临床试验使用腺相关病毒载体进行基因治疗，并取得很好的疗效，包括凝血障碍，遗传性失明和神经退行性疾病等。

在常用的用于基因治疗的载体血清型中，AAV9较其他病毒载体更容易通过血脑屏障，可以经静脉注射后运输至中枢神经系统，感染约60%的运动神经元。AAV9作为基因治疗工具载体，已在多种罕见病的治疗中广泛应用。然而目前尚无AAV标准化的病毒滴度测定和临床剂量使用标准，给rAAV治疗载体的质控和不同临床试验结果的比较造成了困难。此外，高剂量的AAV病毒的免疫原性甚至毒性也成为基因治疗领域不容忽视的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于AAV9 ELISA定量检测的单克隆抗体和试剂盒，针对广泛应用的基因治疗载体AAV9，制备特异性的单克隆抗体，建立敏感且特异的AAV9定量方法，可用于AAV9的外壳鉴定、病毒的滴度测定及临床研究中的剂量判断。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种用于AAV9 ELISA定量检测的单克隆抗体1A7-1G3，所述单克隆抗体1A7-1G3的重链可变区包括三个互补决定区，所述互补决定区的氨基酸序列分别如SEQID NO.1~SEQ ID NO.3所示；

所述单克隆抗体1A7-1G3的轻链可变区包括三个互补决定区，所述互补决定区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4~SEQ ID NO.6所示。

优选的，所述单克隆抗体1A7-1G3的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。

优选的，编码所述单克隆抗体1A7-1G3的重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。

优选的，所述单克隆抗体1A7-1G3的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。

优选的，编码所述单克隆抗体1A7-1G3的轻链可变区的核苷酸序列如SEQ IDNO.10所示。

本发明还提供了上述单克隆抗体1A7-1G3在制备特异性检测AAV9的工具中的应用。

优选的，所述工具包括双抗体夹心ELISA试剂盒。

本发明还提供了一种检测AAV9的双抗体夹心ELISA试剂盒，所述试剂盒利用单克隆抗体1A7-1G3进行包被和标记。