[发明专利]快速鉴定杨梅果实成熟期的分子标记引物组合及其应用

权利要求书

1.一组快速鉴定杨梅果实成熟期性状的分子标记引物组合，其特征在于所述引物组合包括BS8.1-25849-F和BS8.1-25849-R，具体序列为：

BS8.1-25849-F：5’-GCCACCTACACCTACACCGTTAAGGGCAAAAACTA-3’，

BS8.1-25849-R：5’-GAGTCCAATATGAATGCAAGTTAACCAAG-3’。

2.权利要求1所述的分子标记引物组合在快速鉴定杨梅果实成熟期性状是否为早熟类型的应用。

3.一种快速鉴定杨梅果实成熟期性状的方法，其步骤包括：

（1）引物合成：合成权利要求1所述的引物组合BS8.1-25849-F和BS8.1-25849-R；

（2）DNA的提取：提取待测杨梅样本中的基因组DNA；

（3）PCR扩增：基于上述杨梅基因组DNA，使用引物BS8.1-25849-F和BS8.1-25849-R进行PCR扩增，预先加入至少一个已确定杨梅果实成熟期性状为早熟品种的样本基因组DNA作为内参；

（4）扩增产物检测与分析：使用荧光定量PCR仪进行基因型检测分析，若有PCR扩增产物出现且与内参样本聚集为一组者即视为果实成熟期性状为早熟的类型，若没有任何PCR扩增产物出现者视为其他类型。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述步骤（3）中PCR扩增的体系为：20 ng/μL的样本基因组DNA模板1.0 μL，2×SG Fast qPCR Master Mix 5 μL，10 μM的 BS8.1-25849-F引物 0.5 μL，10 μM的 BS8.1-25849-R引物 0.5 μL，ddH₂O补足至10 μL；扩增PCR程序如下：95℃ 3 min， 然后运行28个循环反应，每个循环为95℃ 3 s，60℃ 30 s。