[发明专利]一种铁皮石斛发酵液的制备方法

说明书

本发明公开了一种铁皮石斛发酵液的制备方法，属于微生物领域。该方法包括以下步骤：S1：从酵母菌保存斜面上取孢子接种于活化培养基上进行活化，得到活化后的酵母菌；S2：将S1中得到的活化后的酵母菌块接种到种子培养基中进行扩大培养，得到种子液；S3：取出S2中得到的种子液接种到含有铁皮石斛的发酵培养基中进行发酵，得到铁皮石斛发酵物。本发明提供的铁皮石斛发酵液制备方法简单、高效，可对铁皮石斛的发酵产物研究提供新方法，并且发酵液中富含多糖、黄酮与酚等活性物质。

技术领域

本发明涉及一种发酵技术领域，尤其涉及铁皮石斛发酵技术。

背景技术

铁皮石斛(Dendrobium officinale)，兰科石斛属，又称为“黑节草”或“铁皮枫斗”，其根为肉质气生根，干燥茎为名贵中药铁皮石斛，具有植物黄金的美誉，是中医传统养阴重要用药。铁皮石斛含有多糖、生物碱、氨基酸和微量元素等物质，此外还有联苄类化合物和菲类化合物、香豆素类等物质。它在医学上有免疫调节作用、抗肿瘤作用、降血糖作用、抗肝功能损伤作用，此外还有抗衰老、抗氧化的作用。此外，铁皮石斛具有“益胃”“生津”的功效，“益胃”主要与提高胃蛋白酶活性的作用有关，在生活中铁皮石斛常用来改善肠胃疾病症状；“生津”则是与铁皮石斛具有促进唾液分泌作用有关。

随着生物酶技术的发展，普遍采用酶分离法来获得原生质体。常用酶制剂有果胶酶、纤维素酶、木聚糖酶等酶制剂，而纤维素酶具有使细胞壁被破坏的能力。酵母菌被广泛应用于传统发酵食品行业，是酱油、料酒、馒头、面包等食品的关键发酵菌种。酵母菌在不同培养基以及培养条件下生长速度、产孢丝有所不同。

若能优化高产纤维素酶和酵母菌的混合菌株发酵条件，使铁皮石斛发酵液中的化学物质产出增加，是能为工业应用带来重要经济价值的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种铁皮石斛发酵液的制备方法，能够解决铁皮石斛发酵液中的化学物质产出不足的问题。

为了达到上述目的本发明采用如下技术方案：

一种铁皮石斛发酵液的制备方法，包括以下步骤：

S1：从酵母菌与重组大肠杆菌保存斜面上取孢子分别接种于活化培养基上进行活化培养至OD₆₀₀＝0.6，得到活化后的酵母菌与重组大肠杆菌，重组大肠杆菌的基因序列如SEQ ID NO.1所示；

S2：将S1中得到的活化后的酵母菌与重组大肠杆菌菌块分别接种到各自种子培养基中进行扩大培养，得到种子液；

S3：取出S2中得到的种子液接种到含有铁皮石斛的发酵培养基中进行发酵，得到铁皮石斛发酵物。

进一步地，所述活化培养基按重量百分比计，组成为1％胰蛋白胨、1％酵母粉、1％葡萄糖、0.5％氯化钠、0.1％磷酸氢二钾，余量用双蒸水溶解定容；活化条件是37℃、220rpm。

进一步地，所述发酵培养基包括：碳源、铁皮石斛、蒸馏水、种子液即是混菌，混菌包含酵母菌与重组大肠杆菌。

进一步地，所述碳源选自葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖、甘油，其用量是体积分数2％-10％；

所述铁皮石斛、蒸馏水的料液比g/mL是1：3～5；

所述酵母菌与重组大肠杆菌的体积比是1～3：1～3。

进一步地，所述碳源是乳糖；

所述发酵培养基包括：乳糖，铁皮石斛，蒸馏水，混合菌液；

各成分用量比例为：乳糖体积分数是6％，铁皮石斛5g，铁皮石斛：蒸馏水g/mL＝1：4.5，混菌5mL，酵母菌菌液：大肠杆菌菌液mL＝2:3。

进一步地，所述发酵的条件为温度4～50℃，发酵天数是1～5d。