[发明专利]PET水解酶IsPETase突变酶及编码基因及工程菌有效
| 申请号： | 202110900376.8 | 申请日： | 2021-08-06 |
| 公开（公告）号： | CN113774041B | 公开（公告）日： | 2022-09-02 |
| 发明（设计）人： | 齐崴;尤生萍;殷庆典;苏荣欣 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N9/18 | 分类号： | C12N9/18;C12N15/55;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 陆艺 |
| 地址： | 300350 天津市津南区海*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | pet 水解 ispetase 突变 编码 基因 工程 | ||
1.PET水解酶IsPETase突变酶，命名为IsPETaseR280A/S121K-cSP，其特征在于所述IsPETaseR280A/S121K-cSP的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.编码IsPETaseR280A/S121K-cSP的基因，其特征是所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.含有权利要求2所述基因的重组质粒pET-22b-IsPETaseR280A/S121K-cSP。
4.含有权利要求3所述重组质粒的工程菌BL21(DE3)/pET-22b-IsPETaseR280A/S121K-cSP。
5.权利要求4的工程菌BL21(DE3)/pET-22b-IsPETaseR280A/S121K-cSP表达得到的IsPETaseR280A/S121K-cSP在水解PET中的应用。
6.根据权利要求5所述应用，其特征是包括如下步骤：
向pH值为8.0～10.0的50mM甘氨酸-NaOH缓冲液中加入聚对苯二甲酸乙二醇酯使终浓度为60～100mg/mL；加入IsPETaseR280A/S121K-cSP使终浓度为400～500nM；在30～40℃，220～300rpm条件下孵育5～7天。
7.根据权利要求5所述应用，其特征是包括如下步骤：
向pH值为8.0～10.0的50mM甘氨酸-NaOH缓冲液中加入聚对苯二甲酸乙二醇酯使终浓度为60～100mg/mL；加入IsPETaseR280A/S121K-cSP使终浓度为400～500nM，加入MHETase-cSP使终浓度为50～100nM；在30～40℃，220～300rpm条件下孵育5～7天；所述MHETase-cSP的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。
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