[发明专利]一种运用PCR引物检测Diaporthe novem的方法

说明书

本发明涉及使用PCR技术检测植物及植物产品中Diaporthe novem的方法，属于植物病原真菌检测领域。本发明设计合成了D.novem的特异性引物，用于对D.novem基因组DNA的特异检测。本发明建立了一种快速简便、特异性强、准确可靠的D.novem的分子检测方法，一个工作日内完成整个检测。

技术领域

本发明涉及使用PCR技术检测植物及植物产品中Diaporthe novem J.M. Santos,Vrandečić A.J.L. Phillips, sp. nov.的方法，属于植物病原真菌检测领域。

背景技术

Diaporthe novem属真菌界（Fungi），子囊菌门（Ascomycota），子囊菌纲（Ascomycetes），间座壳目（Diaporthales），间座壳科（Diaporthaceae），间座壳属（Diaporthe），其无性阶段为Phomopsissp.9。它与严重危害大豆的大豆北方茎溃疡病菌D. caulivora，大豆南方茎溃疡病菌D. aspalathi 和大豆拟茎点种腐病菌D. longicolla互为近似种，其中大豆北方茎溃疡病菌和大豆南方茎溃疡病菌被列入我国进境植物检疫性有害生物名录。

D. novem最早由Jorge Manuel Santos等人于2011年正式命名，现有资料显示该病菌在智利、克罗地亚、意大利、葡萄牙、南非和澳大利亚等地区有分布。危害大豆、向日葵、猕猴桃、葡萄、金橘和青柠等重要经济作物，引起种子和果实腐烂，造成严重经济损失，也在绣球花、南非红茶、茜草科拉拉藤属上有分离报道，我国尚未见报道。

大豆作为重要的粮油兼用作物、饲料原料，在国内有着巨大的需求，是我国最重要的进口农产品之一，2019年我国大豆进口总量达到8851万吨。我国口岸多次检出D. novem，由于该病菌不在检疫性名录内，其危害往往容易被忽视。该病菌引起大豆茎秆溃疡和种子腐烂，导致大豆产量和品质下降。由受害种子生产的豆油及大豆榨油后所得饲料、肥料及豆饼等其它产品质量低下，不适合作为饲料使用。此外，该病菌寄主广泛，一旦随进境大豆传入我国，将会对我国大豆及其它农作物生产、农业生态造成难以估量的损失。

鉴于D. novem传入我国的风险性及病菌危害的严重性，为保护我国农林业生产安全，维护国家利益，进一步规范这一重要病害的检疫，提高口岸疫情检测的准确性和验放速度，防止该病菌传入我国，建立一套快速、准确、完整的D. novem的检测方法迫在眉睫。

发明内容

本发明收集间座壳属8种真菌（见表1），建立了快速简便、特异性强、准确可靠的间座壳属真菌分子检测方法，能将D. novem准确鉴定出来。该方法检测快速，方法可靠，整个过程在一个工作日内完成，可有效在口岸检测中推广应用。

具体技术方案如下：

本发明目的是提供一种检测D. novem基因组DNA的PCR方法，它包括如下步骤：

（1）植物基因组DNA的提取；

（2）D. novem的特异引物，序列如下：