[发明专利]一种电子束辐射根茎诱变选育炭用丛生竹新种质的方法

权利要求书

1.一种电子束辐射根茎诱变选育炭用丛生竹新种质的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、配制浸竹根茎促芽破眠的复合溶液，所述复合溶液各组分浓度为：蔗糖0.6mol/L、氯化钙0.4 mol/L、硝酸钙0.8 mol/L、磷酸二氢铵 0.6 mol/L、天冬酰胺 0.1 mol/L、谷氨酰胺 0.3 mol/L、赤霉素 0.5 mg/L、吲哚丁酸 0.2 mg/L、0.1 mol/L 氨基酸锌、0.05 mol/L 油菜素甾醇、 0.03 mol/L 壳聚糖和 0.05 mol/L 茶皂素；溶液 pH6.5；

步骤二、配制浸竹根茎促芽生长的有机复合溶液，所述有机复合溶液各组分浓度为：活性竹炭粉 500 mg/L、赤霉素0.2 mg/L、细胞激动素0.4 mg/L、6-苄基腺嘌呤0.1 mg/L、接种活菌量浓度为1.5× 10¹⁰cfu.kg^-1的胶质芽孢杆菌、接种活菌量浓度为2×10¹⁰cfu.kg^-1的多粘类芽孢杆菌、0.1 mol/L氨基酸锌、0.1 mol/L 油菜素甾醇、0.02 mol/L 虾青素、0.06mol/L 酵母硒、接种活菌量浓度为5×10¹⁰cfu.kg^-1 的解淀粉芽孢杆菌，溶液pH6.5；

步骤三、用浸竹根茎促芽破眠的复合溶液浸泡竹根茎，浸泡 6~48 小时，浸泡温度为30℃；

步骤四、采用辐照剂量为 50~600 Gy 的电子束辐照步骤三浸泡后的竹根茎，电子束能量 8~12MeV，功率 15~25kW，频率 80~120Hz；

步骤五、用浸竹根茎促芽生长的有机复合溶液浸泡辐照后的竹根茎，浸泡 6~12 小时，浸泡温度为 30℃；

步骤六、将步骤五浸泡后的竹根茎移栽到培养基质中培养， 30-40 天后长出新笋，40-50 天后形成植株，再用丛生竹专用的 EST-SSR 分子标记技术对上述植株进行筛选，获得突变体植株，对其分篼筛选得到具有优良性状的炭用竹新种质或新品种；

所述步骤六中， EST-SSR 分子标记技术中所用引物选自 SEQ ID NO.1~2、SEQ IDNO.3~4、 SEQ ID NO.5～6、 SEQ ID NO.7～8 中任意一对；

其中，所述 EST-SSR 分子标记技术为：

步骤 1、取叶片，提取基因组 DNA；

步骤 2、以步骤 1 得到的基因组 DNA 为模板，采用 EST-SSR 引物进行EST-SSR PCR扩增；进行 6% 的聚丙烯酰胺凝胶电泳；

反应体系 20μL： 0.9μL 2.5mM dNTP混合溶液、5.0μL 2.5mM 2 X GC buffer、0.2μL5U/μL rTaq DNA聚合酶溶液、2.0μL基因组 DNA、0.5μL 10μM SEQ ID NO.1、3、5或7引物溶液、0.5μL 10μM SEQ ID NO.2、4、6或8引物溶液，余量为ddH₂O；

反应条件：95℃ 5min；95℃ 30s、53℃ 30s、 72℃ 40s， 34 个循环；72℃ 10min；4℃保存；

所述竹根茎为选取茎秆壁厚 0.7～1.6cm、茎秆横切面维管束密度 6～13个/mm²、导管直径 35～50μm、维管束高 90～110μm、维管束宽 120～210μm 的梁山慈竹、硬头黄竹、佯黄竹、甜龙竹、慈竹中的一种带有笋芽的根茎。

2.如权利要求 1 所述的电子束辐射根茎诱变选育炭用丛生竹新种质的方法，其特征在于，所述步骤六中，培养基质为土和草炭以 2∶ 1 重量比混合的基质。

3.如权利要求 1所述的电子束辐射根茎诱变选育炭用丛生竹新种质的方法，其特征在于，所述步骤三中，在浸泡的中间时间段施加双频超声60~120min；所述双频超声的交替频率为 35~65kHz 和 125~135kHz，双频超声交替处理的时间为 5min，双频超声的功率为500W。

4.如权利要求 1所述的电子束辐射根茎诱变选育炭用丛生竹新种质的方法，其特征在于，所述步骤五中，在浸泡的中间时间段施加双频超声45~90min；所述双频超声的交替频率为 35~65kHz 和 125~135kHz，双频超声交替处理的时间为 5min，双频超声的功率为500W。