[发明专利]肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法

权利要求书

1.一种肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

对供试品进行处理，得到目标样A；

对酶标板进行包被以及封闭处理；

将稀释后的供试品以及目标样A分别加入到被包被以及封闭处理的酶标板中，得到供试品测试样和目标样A测试样；

供试品测试样和目标样A测试样中均加入特异性抗血清，得到供试品反应样和目标样A反应样；

向供试品反应样和目标样A反应样中分别加入酶标抗体，孵育，然后加入底物液进行显色反应，并测出OD值；

根据供试品反应样和目标样A反应样中得到的OD值计算出对应的多糖含量，并根据供试品反应样和目标样A反应样的多糖含量计算出吸附率。

2.如权利要求1所述的肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，其特征在于，对所述供试品进行离心处理，离心后的上层清液，即为目标样A。

3.如权利要求2所述的肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，其特征在于，所述供试品进行离心处理的条件包括：相对离心率为(5000～6500)×g、温度为4～6℃以及持续时间为5～10min。

4.如权利要求1所述的肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，其特征在于，对所述酶标板的包被过程包括：将被包被液稀释过的破伤风抗毒素加入至酶标板中，然后在2～8℃的条件下包被16～18h，再使用洗涤缓冲液洗涤酶标板1～2次，对酶标板的封闭处理过程包括：向包被处理过的酶标板中加入封闭液，然后在温度为36.9～37℃条件下放置1～2h，再用洗涤缓冲液洗涤酶标板3～4次。

5.如权利要求1所述的肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，其特征在于，将稀释后的供试品以及目标样A分别加入到被包被以及封闭处理后的酶标板中，并在36.9～37℃的温度下孵育1～2h后，得到供试品测试样和目标样A测试样。

6.如权利要求5所述的肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，其特征在于，所述供试品以及目标样A的稀释倍数为400～600倍。

7.如权利要求1所述的肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，其特征在于，向供试品测试样和目标样A测试样中分别加入特异性抗血清后，均在36.9～37℃条件下孵育1～1.5h，再用洗涤缓冲液洗涤酶标板3～4次后，得到供试品反应样和目标样A反应样。

8.如权利要求1所述的肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，其特征在于，所述酶标抗体为HRP标记羊抗兔IgG或者AP标记羊抗兔IgG。

9.如权利要求8所述的肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，其特征在于，将所述酶标抗体按照1：5000～8000稀释后再分别加入至供试品反应样和目标样A反应样中，在温度为36.9～37℃的条件下孵育1～1.5h后，再用洗涤缓冲液洗涤酶标板5～6次。

10.如权利要求1所述的肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，其特征在于，所述显色反应的条件包括：在温度为36.9～37℃的条件下放置15～20min，再分别加入硫酸溶液进行终止酶反应，最后用酶标仪读取OD值。