[发明专利]一种毛霉菌分型检测的引物探针组合及其应用

权利要求书

1.一种毛霉菌分型检测的引物探针组合，其特征在于，所述毛霉菌分型检测的引物探针组合包括扩增并检测根霉属的引物对和探针、扩增并检测毛霉属的引物对和探针、扩增并检测犁头霉属的引物对和探针、扩增并检测根毛霉属的引物对和探针、扩增并检测小克银汉霉属的引物对和探针中的任意一种或至少两种的组合；

所述毛霉菌分型检测的引物探针组合的检测位点位于28S rRNA序列区域和/或ITS2rRNA序列区域。

2.根据权利要求1所述的毛霉菌分型检测的引物探针组合，其特征在于，扩增所述根霉属的引物对包括SEQ ID No.1～2所示的核苷酸序列，检测所述根霉属的探针包括SEQ IDNo.3所示的核苷酸序列；

优选地，扩增所述毛霉属的引物对包括SEQ ID No.4～5所示的核苷酸序列，检测所述毛霉属的探针包括SEQ ID No.6所示的核苷酸序列；

优选地，扩增所述犁头霉属的引物对包括SEQ ID No.7～8所示的核苷酸序列，检测所述犁头霉属的探针包括SEQ ID No.9所示的核苷酸序列；

优选地，扩增所述根毛霉属的引物对包括SEQ ID No.10～11所示的核苷酸序列，检测所述根毛霉属的探针包括SEQ ID No.12所示的核苷酸序列；

优选地，扩增所述小克银汉霉属的引物对包括SEQ ID No.13～14所示的核苷酸序列，检测所述小克银汉霉属的探针包括SEQ ID No.15所示的核苷酸序列。

3.根据权利要求1或2所述的毛霉菌分型检测的引物探针组合，其特征在于，所述毛霉菌分型检测的引物探针组合还包括扩增并检测内标基因的引物对和探针；

优选地，扩增所述内标基因的引物对包括SEQ ID No.16～17所示的核苷酸序列，检测所述内标基因的探针包括SEQ ID No.18所示的核苷酸序列。

4.根据权利要求1～3任一项所述的毛霉菌分型检测的引物探针组合，其特征在于，所述探针携带荧光基团和淬灭基团；

优选地，所述荧光基团包括ALEX-350、Alexa Fluor 488、CY3、FAM、VIC、TET、CALGold540、JOE、HEX、CALFluorOrange560、TAMRA、CALFluorRed590、ROX、CALFluorRed610、TexasRed、CALFluorRed635、Quasar670、CY5、CY5.5、LC RED640或Quasar705中的任意一种；

优选地，所述淬灭基团包括TAMRA、DABCYL、BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3或Eclipse中的任意一种。

5.一种毛霉菌分型检测的试剂盒，其特征在于，所述毛霉菌分型检测的试剂盒包括权利要求1～4任一项所述的毛霉菌分型检测的引物探针组合。

6.根据权利要求5所述的毛霉菌分型检测的试剂盒，其特征在于，所述毛霉菌分型检测的试剂盒包括含有所述毛霉菌分型检测的引物探针组合的PCR检测液，所述PCR检测液中上游引物和下游引物的加入量比例为1:(48～52)。

7.根据权利要求5或6所述的毛霉菌分型检测的试剂盒，其特征在于，所述毛霉菌分型检测的试剂盒还包括PCR混合液、内标质控、阳性质控和阴性质控；

优选地，所述PCR混合液包括DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺和缓冲液；

优选地，所述内标质控包括含有内标基因的检测位点序列的质粒；

优选地，所述阳性质控包括含有根霉属、毛霉属、犁头霉属、根毛霉属和小克银汉霉属的检测位点序列的质粒；

优选地，所述阴性质控包括水。

8.一种权利要求5～7任一项所述的毛霉菌分型检测的试剂盒以非疾病诊断和/或治疗为目的的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括以下步骤：

提取样本的核酸，进行荧光定量PCR扩增，对熔解曲线进行分析，对样本中的毛霉菌及其具体分型情况进行判断。