[发明专利]一种生物样本核酸释放保存剂

说明书

本发明“一种生物样本核酸释放保存剂”属于分子生物学技术领域，公开了一种可裂解常见的检测样本且能直接用于下游的PCR检测或高通量测序且裂解后所释放的样本核酸可以稳定的长期保存的方法，该保存剂包含了的Tween20（0.01%‑10%，V/V）、糖原（2‑500ng/μl）、甲酰胺（2‑500ng/μl）、人工合成的25nt的poly A（2‑500ng/μl）、氢氧化钾（0.01mM‑50mM），甲酚红（0.01%‑10%，质量/体积），溶剂为无核酸酶水，使用该方法可肉眼对PCR体系进行质量控制，耗时短，效率高，操作简便，生产成本低，保存时间长，极具市场推广价值。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种新型的无需进行后续核酸提取又能直接用于检测的保存剂且裂解后所释放的样本核酸（包括DNA与RNA）可以稳定的长期保存的保存剂及制备方法。

背景技术

核酸是指脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的总称，是由许多核苷酸单体聚合成的生物大分子聚合物，是生命的最基本物质之一，是所有已知生命形式必不可少的组成物质，是所有生物分子中最重要的物质，广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内，核酸由核苷酸组成，而核苷酸单体由五碳糖、磷酸基和含氮碱基组成；如果五碳糖是核糖，则形成的聚合物是RNA；如果五碳糖是脱氧核糖，则形成的聚合物是DNA。

近年来，核酸检测在各个领域的应用越来越多，经常涉及处理各种样本（包括：组织、鼻拭子、咽拭子、血液、血清、唾液、尿液等)检测和基因扩增。通常情况下，人们利用各种品牌的核酸提取试剂盒来实现上述各种样品的处理以及核酸的提取。

核酸检测具有高灵敏度和高特异性的天然优势，样本中核酸的提取、纯化和保存直接影响下游的检测质量，利用核酸提取试剂盒提取一个样品核酸，不仅耗时长，操作步骤繁琐，而且消耗的费用也不低。

目前已有几种用于直接处理检测样本而无需提纯核酸的试剂面世，申请号202010130611.3公布了一种可以裂解样本的试剂，搭配其独有的PCR试剂，可以直接检测其中病毒核酸。申请号为201510973871.6的专利同样也是公布了一种可以直接检测常见样本类型中的病毒核酸的方法，其原理是通过蛋白质变性剂使得病毒外壳蛋白变性，从而释放出病毒核酸，然后再用特异性的引物和探针进行PCR检测。公开号为108823201B发明了一种RNA核酸释放剂及其用应用，可以使样本中的RNA释放出来，然后可代替胍盐或尿素，用于水煮法RNA提取，简化了RNA提取物在PCR之前的纯化过程。已经商业化应用的保存样本核酸的试剂，如赛默飞公司（ThermoFisher）的RNAlater， RNAlater中的样本RNA可以在4℃下稳定保存一个月，室温下保存7天，但RNAlater中的RNA样本不能直接用于下游的PCR检测，必须经过繁琐的纯化步骤后才能进行PCR扩增。但是上述技术方案仍然存在如下问题。

上述技术方案主要用于检测病毒、细菌等，应用范围窄。

上述技术方案并没有提供一种样本经裂解释放出的核酸长期保存或运输的方法。

上述技术方案无法直接进行PCR扩增，还要进行传统的核酸纯化，操作繁琐。

综上可知，现有技术方案实际使用上显然存在明显缺陷与不便，可以实现直接扩增但不能长期保存核酸，可以长期保存核酸但是不能直接扩增，所以有必要加以改进。

发明内容