[发明专利]一种从西兰花种子中提取萝卜硫素的方法

权利要求书

1.一种从西兰花种子中提取萝卜硫素的方法，其特征在于，以西兰花种子为原料酶解后获得粗提液，粗提液经液液萃取进行分离，得到萝卜硫素粗品；粗品以硅胶为固定相，通过柱层析获得纯度大于90％的萝卜硫素纯品。

2.按权利要求1所述的从西兰花种子中提取萝卜硫素的方法，其特征在于，

1)西兰花种子粗提液的制备：将西兰花种子粉碎，粉碎后脱脂，脱脂后的种子粉中加入去离子水于30℃～40℃水浴酶解2～4h，而后醇提获得西兰花种子粗提液；

2)萝卜硫素粗品的分离：将西兰花种子粗提液抽滤，滤液浓缩，浓缩液经乙酸乙酯反复萃取收集萃取相，浓缩得到萝卜硫素粗提物；将萝卜硫素粗提物用含10％～40％乙醇的水溶液(v/v)混合得粗品溶液，粗品溶液再经乙酸乙酯反复萃取收集萃取相，萃取相中加入过量无水硫酸钠至溶液澄清，而后浓缩，浓缩液溶于正己烷-乙醇体系中，混合后通过硅胶柱层析，以体积比为6～4:4～6正己烷/乙醇溶液作为洗脱液进行梯度洗脱，收集洗脱组分；

3)萝卜硫素粗品的纯化：取上述洗脱组分溶于正己烷-乙醇体系中，再经硅胶柱层析，以二氯甲烷-甲醇作为洗脱液进行洗脱，收集第一条色带的洗脱组分，即获得含量90％以上的目标物纯品。

3.按权利要求2所述的从西兰花种子中提取萝卜硫素的方法，其特征在于，所述步骤1)分散后种子粉经石油醚进行脱脂，脱脂后的种子粉与去离子水按1:4～6(w/v)混合，混合后水浴中酶解，酶解后加入无水乙醇，超声(280～360W，脉冲间隔3～8s)辅助提取30～40min后静置，得到西兰花种子粗提液。

4.按权利要求2所述的从西兰花种子中提取萝卜硫素的方法，其特征在于，所述步骤2)浓缩液与正己烷-乙醇体系混合后通过硅胶(200～300目)柱层析，上样量为2.5～5g萝卜硫素粗品，且粗品与硅胶的质量比控制在1:3～8，上样流速控制在0.5～1mL/min。

5.按权利要求2所述的从西兰花种子中提取萝卜硫素的方法，其特征在于，所述步骤2)中的洗脱液为正己烷-乙醇按体积比6～4:4～6；并以3～10mL/min流速进行梯度洗脱，收集第35min到85min的洗脱液。

6.按权利要求4所述的从西兰花种子中提取萝卜硫素的方法，其特征在于，所述步骤2)中浓缩液与正己烷/乙醇按1:4～8(w/v)比例混合；其中，正己烷-乙醇体系中正己烷与乙醇体积比为6:4。

7.按权利要求2所述的从西兰花种子中提取萝卜硫素的方法，其特征在于，所述步骤3)取上述洗脱组分，浓缩，与二氯甲烷/甲醇体系按质量体积比1:8～13混合，混合后通过硅胶(200～300目)柱层析，上样量为80～120mg萝卜硫素粗品，且粗品量与层析柱硅胶的质量比需控制在1:125～200，上样流速控制在0.3～0.8mL/min，而后以二氯甲烷/甲醇体系，体积比为30:1作为洗脱液，以2～4mL/min流速进行梯度洗脱，收集第一条色带全部洗脱组分，即获得含量90％以上的目标物纯品。

8.按权利要求2所述的从西兰花种子中提取萝卜硫素的方法，其特征在于，步骤3)中，当目标化合物洗脱收集完毕后(约20～30min)，将甲醇浓度提升至100％，进行层析柱清洗(约5min)，清洗完毕后，采用两倍柱体积二氯甲烷/甲醇(30:1，v/v)洗脱体系平衡。