[发明专利]肿瘤干细胞标志物EpCAM特异性结合的多肽及其应用

说明书

本发明公开了肿瘤干细胞标志物EpCAM特异性结合的多肽及其应用，所涉及多肽的氨基酸序列为：NSPTNATQSPIW。本发明筛选和初步鉴定获得的EpCAM靶向多肽具有明显的与EpCAM分子和癌干细胞结合的特异性，可用于针对CSC的癌症早期分子影像学诊断试剂、新型高效低毒抗肿瘤靶向治疗药物的研发。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体对癌干细胞具有良好的结合特异性和敏感性的多肽及其该多肽诊断和治疗癌症的应用。

背景技术

肿瘤干细胞(cancer stem cell，CSC)是一个存在于癌组织中的可以自我再生且仍然分化潜能的细胞亚群。目前，已有大量实验证实CSC与实体瘤的发生、转移、复发以及化疗和放疗的治疗效果有关。因此，学术界的共识是癌化疗时应尽可能多地杀灭CSC，靶向CSC成为新型癌化疗靶向药物研发的一个重要考虑因素。

发明内容

针对现有技术的缺陷或不足，本发明研究发现了一种EpCAM特异性结合的多肽。所述多肽的氨基酸序列为：NSPTNATQSPIW。

所述多肽能够特异性结合EpCAM分子及癌细胞，而不识别阴性对照组及正常细胞。经酶联免疫实验(ELISA)、细胞免疫荧光等证明所述多肽序列与EpCAM分子拥有良好的亲和力和特异性，并且，在分子对接中发现所获得的最佳克隆多肽序列能与EpCAM成功对接，其结合的空间结构和自由能效果良好。

本发明的多肽可用于针对CSC的癌症早期分子影像学诊断试剂、新型高效低毒抗肿瘤靶向治疗药物的研发。

附图说明

图1为随机十二肽pIII融合蛋白的N末端序列；

图2为专用密码子表；

图3为五轮筛选结果及五轮筛选优势克隆的富集倍数；

图4为ELISA鉴定噬菌体克隆与EpCAM的亲和力(图4A)及数据分析(图4B)；

图5为五条共有序列的代表性阳性噬菌体克隆与细胞亲和力的免疫荧光鉴定；

图6为ESP1中各阳性噬菌体克隆与细胞亲和力的免疫荧光鉴定，其中：A1:PBS+MCF-7；B1:URP+MCF-7；C1:R2+MCF-7；D1:R3+MCF-7；E1:R6+MCF-7；F1:R8+MCF-7；G1:R9+MCF-7；H1:R10+MCF-7；I1:R18+MCF-7；J1:R21+MCF-7；K1:R26+MCF-7；A2:PBS+HepG2；B2:URP+HepG2；C2:R2+HepG2；D2:R3+HepG2；E2:R6+HepG2；F2:R8+HepG2；G2:R9+HepG2；H2:R10+HepG2；I2:R18+HepG2；J2:R21+HepG2；K2:R26+HepG2；A3:PBS+HEK293；B3:URP+HEK293；C3:R2+HEK293；D3:R3+HEK293；E3:R6+HEK293；F3:R8+HEK293；G3:R9+HEK293；H3:R10+HEK293；H3:R18+HEK293；J3:R21+HEK293；K3:R26+HEK293；

图7为ESP1与EpCAM分子对接结果，图中绿色代表的是EpCAM分子构型，紫色(图示圈中为主要紫色)代表本发明筛选的多肽的空间构型，9幅图分别代表从各个空间维度的分子对接(即构型上最具亲和力的结合处)。

具体实施方式

除非另有说明，本文中的术语或方法根据普通技术人员的认识或采用已有方法实现。

本文所述肿瘤干细胞标志物EpCAM是指肿瘤干细胞中的上皮/内皮细胞黏附分子。上皮/内皮细胞黏附分子(EpCAM，epithelial/endothelial cell adhesion molecule)是一种糖蛋白，包含了314个氨基酸，分子量大约40kDa。它在上皮或内皮性的肿瘤细胞表达量高，其作为一种黏附分子，调节细胞黏附及迁移。