[发明专利]一种抑制二肽基肽酶IV功能的南极磷虾降血糖寡肽及用途

说明书

本发明公开了一种具有抑制二肽基肽酶IV功能的南极磷虾降血糖寡肽及用途，具体是以南极磷虾为原料，通过超声脱脂、酶解，膜超滤分级和色谱制备得到二肽基肽酶Ⅳ抑制寡肽Leu‑Pro‑Gly‑Thr‑Arg‑Ile‑Pro‑Ala(LPGTRIPA)，ESI‑MS测定分子量为824.0Da。本发明制备的南极磷虾的二肽基肽酶Ⅳ抑制寡肽LPGTRIPA可显著抑制DPP‑Ⅳ活力，显著降低模型小鼠餐后血糖水平，改善小鼠口服葡萄糖糖耐量和麦芽糖糖耐量，降低模型小鼠的甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)的含量，且安全无毒副作用，可应用于治疗或者辅助治疗II型糖尿病的特医食品、保健品和药物。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种源于南极磷虾的二肽基肽酶Ⅳ抑制寡肽及其治疗糖尿病的用途。

背景技术

糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢性疾病。近年来，我国糖尿病发病率从1980年的0.6％增长到目前的11.6％。国家卫计委最新公布数据表明，我国糖尿病人群已达1.14亿人，其中II型糖尿病接近占糖尿病人群的90％。此外，糖尿病已成为中国慢性肾病(CKD)的首要因素，约20％-40％的糖尿病患者合并慢性肾病，合并症患者的心肾事件风险显著增加，预期寿命显著降低；除此以外，糖尿病并发症还涉及血管、眼、足等多个器官，致残、致死率高，治疗周期长、开销大，给国家、患者及家庭带来沉重的经济负担，成为严重影响我国国民健康的公共问题之一。

胰高血糖素样肽-1(GLP-1)是回肠内分泌细胞分泌的一种脑肠肽，可以通过可以刺激胰岛素、抑制升糖素、抑制胃排空和让胰岛细胞重生的方式来降低血糖。但人体自身产生的GLP-1极易被体内的二肽基肽酶Ⅳ(DPP-Ⅳ)降解，其血浆半衰期不足2分钟。因此，寻找DPP-Ⅳ抑制剂，降低机体分泌的GLP-1的降低速率，维持体内GLP-1的水平，就可以抑制胰高血糖素分泌，从而降低血糖。该方法成为开发治疗糖尿病药物的主攻方向之一。

南极磷虾资源被喻为人类未来的海洋蛋白资源仓库，具有极为重要的开发价值，研究人员利用多种技术指备了系列功能肽，如抗氧化肽、高F值寡肽、降压肽等。例如，吉薇等以南极磷虾为原料制备二肽基肽酶Ⅳ(DPP-Ⅳ)抑制肽AP、IPA和IPAVF。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抑制二肽基肽酶IV功能的南极磷虾降血糖寡肽及用途，其可应用于治疗或者辅助治疗II型糖尿病的特医食品、保健品和药物。为达到上述发明目的，采用如下技术方案：

一种南极磷虾寡肽，其特征在于，所述寡肽的氨基酸序列为Leu-Pro-Gly-Thr-Arg-Ile-Pro-Ala(LPGTRIPA)。

优选地，该寡肽为八肽化合物，分子量为824.0Da。

本发明还公开了一种制备上述寡肽的方法，包括如下步骤：

1)南极磷虾预处理：将南极磷虾捣碎后加入乙酸乙酯溶液，脱脂后离心，收集固体沉淀干燥，即得脱脂虾粉；

2)南极磷虾虾粉的酶解：将脱脂虾粉加入到缓冲液中搅匀，溶液调温至45-55℃，加入蛋白酶A，酶解后调溶液pH加入蛋白酶B，酶解后，溶液冷却至室温，离心收集上清液，即得南极磷虾蛋白酶解液；

3)南极磷虾寡肽寡肽的制备：将南极磷虾蛋白酶解液经超滤膜进行分级，收集分级组分，测定各组分对二肽基肽酶Ⅳ的抑制作用，选择活性最好的组分依次经凝胶柱层析和反相高效液相色谱纯化，即得二肽基肽酶Ⅳ抑制寡肽。

优选地，步骤1)包括：

南极磷虾解冻，去头和皮，虾肉组织捣碎机捣碎，按料液比1g:5-20mL加入乙酸乙酯溶液，110-130W超声20-40min脱脂，重复2-5次，于4℃、6000g离心5-20min，固体沉淀干燥，得脱脂虾粉。

更优选地，步骤1)包括：