[发明专利]一种适用于HEK293细胞的无血清培养基

说明书

本发明提出了一种适用于HEK293细胞的无血清培养基，包括氨基酸、无机盐、维生素、核苷、添加剂、抗结团剂和稳定剂；每1L培养基含氨基酸275‑1650mg，无机盐5470.2‑37103mg，维生素10.92‑124.4mg，核苷40‑800mg，添加剂1060‑3250mg，抗结团剂100‑1000mg，稳定剂100‑1000mg，余量为水；所述抗结团剂为F68，稳定剂为glutaGRO。本发明培养基无动物源，不含蛋白质或生长因子，支持多种HEK293及其衍生型的细胞，具有抗结团、提高细胞稳定性和延长保质期的作用，并且能在单位时间获得更高的蛋白产量。

技术领域

本发明涉及培养基技术领域，尤其涉及一种适用于HEK293细胞的无血清培养基。

背景技术

从体外生化研究到制药和临床应用等各个领域都需要用到大量高质量的重组蛋白。生产具有复杂翻译后修饰的重组蛋白的技术代表了结构和功能研究的主要挑战。

可用于瞬时转染的哺乳动物细胞系的快速建立和高回收率解决了这一障碍。在最常用的哺乳动物细胞系中，人胚胎肾293(HEK293)细胞因其生长速度快、相对易于操作和高转染效率等优点，而成为研究和规模生产的标准选择。

细胞培养基是决定细胞体外生长代谢最重要、最直接的环境因素。目前大多数合成细胞培养基均需要补充动物血清才能支持细胞的体外生长、增殖，而动物血清的使用带来了动物性病原微生物污染培养物的可能，因此推动了动物细胞无血清培养基的发展。

无血清培养基一般是由基础培养基和替代血清的补充因子组成的。无血清培养技术是细胞培养研究中的一个里程碑。由于无血清培养基全部是由已知成分组成的，不仅为研究和阐明细胞生长、增殖和分化的机制这一生命科学中的根本问题提供了有力的工具，而且为现代生物技术如基因工程、蛋白质工程、细胞工程和单克隆抗体等的应用奠定了基础。

为了使HEK293细胞能够大规模应用于瞬时转染，常将其驯化为悬浮生长；然而在悬浮培养过程中HEK293细胞极易结团，细胞团直接影响细胞活性，导致HEK293细胞无法高密度扩增、连续传代。现有抗结团HEK293细胞无血清培养基中的谷氨酰胺容易降解，并且影响细胞生长，因此急需研发既抗结团，又不影响细胞生长的HEK293细胞无血清培养基。

发明内容

有鉴于此，本发明提出了一种化学成分确定，无动物源，不含蛋白质或生长因子，支持多种HEK293及其衍生型细胞的无血清培养基。

本发明的技术方案是这样实现的：本发明提供了一种适用于HEK293细胞的无血清培养基，包括氨基酸、无机盐、维生素、抗结团剂和稳定剂；每1L培养基含氨基酸275-1650mg，无机盐5500.2-37103mg，维生素10.92-125mg，核苷40-800mg，添加剂1060-3250mg，抗结团剂100-1000mg，稳定剂100-1000mg，余量为水。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述抗结团剂为F68，稳定剂为glutaGRO。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述氨基酸组分及含量为：甘氨酸10-100mg/L、L-丙氨酸5-50mg/L、L-精氨酸50-200mg/L、L-天冬酰胺10-100mg/L、L-天冬氨酸5-50mg/L、L-盐酸半胱氨酸-H₂O 50-200mg/L、L-盐酸胱氨酸10-50mg/L、L-谷氨酸10-100mg/L、L-组氨酸10-50mg/L、L-异亮氨酸10-100mg/L、L-亮氨酸10-100mg/L、L-赖氨酸50-100mg/L、L-蛋氨酸5-50mg/L、L-苯丙氨酸5-50mg/L、L-脯氨酸5-50mg/L、L-丝氨酸5-50mg/L、L-苏氨酸5-50mg/L、L-色氨酸5-50mg/L、L-酪氨酸二钠盐10-100mg/L和L-缬氨酸5-50mg/L。