[发明专利]一种含有PDRN的修复再生组合物及其制备方法

权利要求书

1. 一种含有PDRN的修复再生组合物，其特征在于：它包含如下重量份成分：PDRN 0.05～1.0份、透明质酸0.02～1.0份、积雪草提取物0.05～1份。

2.根据权利要求1所述的一种含有PDRN的修复再生组合物，其特征在于：所述PDRN为三文鱼的精巢提取物，其分子量为5KD～60 KD。

3.根据权利要求1所述的一种含有PDRN的修复再生组合物，其特征在于：所述透明质酸包含透明质酸钠交联聚合物、透明质酸钠、乙酰化透明质酸钠、水解透明质酸钠中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的一种含有PDRN的修复再生组合物，其特征在于：所述积雪草提取物包含积雪草甙和羟基积雪草苷。

5.一种含有PDRN的修复再生组合物的制备方法，其操作步骤如下：

步骤（一）、将冷冻保存的三文鱼鱼精巢1kg取出，解冻后再用去洗涤两次；再将鱼精巢彻底粉碎成浆状；

步骤（二）、将浆状物按照质量体积比为1:2的比例，加入0.03M磷酸酸钠缓冲溶液，于室温搅拌5h；

步骤（三）、将缓冲液以3000rpm的转速离心20min，弃上清液，用0.03M磷酸酸钠缓冲溶液，将其沉淀洗涤3～5次，离心得到鱼精细胞的沉淀物；

步骤（四）、将含鱼精细胞的沉淀物加入至0.7mM EDTA的盐溶液中搅拌均匀，其中，沉淀物与盐溶液的质量体积比为1:20；

步骤（五）、按照鱼精巢原料质量与胰蛋白酶质量为500:1的比例加入至反应体系中，并在40℃下酶解18～20h；

步骤（六）、在反应体系中加入鱼精巢原料重量10％的SDS、最终浓度为1.5～2M的NaCl，持续搅拌3～5h后离心沉淀，收集上清液；

步骤（七）、上清液按照3:1的体积比加入至预先冷却的无水乙醇或异丙醇中搅拌，使絮状的DNA析出，再用75％乙醇溶液洗涤、离心3～5次，得到的DNA沉淀；

步骤（八）、DNA沉淀用去离子水制成10g/L的溶液，再加入2000U的内切酶于37℃溶液中反应15～20h；再加入脱氧核糖核酸酶3mg/L浓度，于37℃下次序反应1h；加入10％的SDS、最终浓度为1.5～2M的NaCl，持续搅拌3～5h后离心沉淀，收集上清液；上清液按照2:1的体积比加入至预先冷却的乙醇中搅拌，使絮状的DNA析出，溶液以7000rpm的转速离心1h，再用75％乙醇溶液洗涤、离心3～5次，得到的DNA沉淀,冻干处理得到白色PDRN固体。