[发明专利]一种牛皮制备可注射温敏水凝胶的方法及水凝胶的应用

权利要求书

1.一种牛皮制备可注射温敏水凝胶的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）牛皮预处理

将牛皮去除毛发收集牛毛待用，将去除牛毛后的牛皮经去除皮下脂肪以及清洗、脱脂处理，备用；

（2）从牛皮提取胶原蛋白

将步骤（1）得到的牛皮粉碎，放入到氯化钠溶液中浸泡，取出清洗干净后，加到盐酸溶液中，并加入蛋白酶提取；然后，把固体不溶物去除，溶液加到透析袋中透析，调节pH值和浓度，得到牛皮胶原蛋白溶液；

（3）从牛毛提取半胱氨酸

将步骤（1）收集到的牛毛加到浓盐酸内反应；把固体不溶物去除，对溶液进行脱色后，调节溶液的pH，收集析出物；把析出物加到稀盐酸内，加入金属粒后进行反应，过滤，收集滤液；对滤液通入硫化氢，过滤，然后进行pH和浓度的调节，得到牛毛半胱氨酸溶液；

（4）温敏水凝胶干粉制备

对步骤（2）得到的牛皮胶原蛋白溶液加入N-羟基琥珀酰亚胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐，加入步骤（3）得到的牛毛半胱氨酸溶液，搅拌，加入无水乙醇，收集释出物并用无水乙醇冲洗，干燥，分装到西林瓶，灭菌，得到温敏水凝胶干粉；

（5）可注射温敏水凝胶制备

把生理盐水加到步骤（4）得到的温敏水凝胶干粉，搅拌均匀后用注射器吸出，得到可注射温敏水凝胶；

步骤（2）所述的氯化钠溶液质量为牛皮质量的10~20倍，浓度为0.01~0.1 M；所述的浸泡时间为2~5小时；

步骤（2）所述的盐酸溶液浓度为0.01~0.1 M；所述的蛋白酶为胃蛋白酶；步骤（2）所述的提取时间为6~8小时；步骤（2）所述的透析袋的截留分子量为1000~5000 Da；

步骤（2）所述的调节pH值和浓度为使用磷酸二氢钠和磷酸氢二钠把pH值调节到4.5~6.5，用pH值4.5~6.5的磷酸缓冲溶液把胶原蛋白溶液浓度调节到0.5~5wt%；

步骤（3）所述的浓盐酸浓度为5~10 M、质量为牛毛质量的1.5~3倍；步骤（3）所述将步骤（1）收集到的牛毛加到浓盐酸内反应为100~150 ^oC反应5~10小时；所述的对溶液进行脱色为加入溶液重量0.1~0.5倍的活性炭，加热煮沸1~5小时后分离固体；所述脱色后，把溶液的pH调节为4.5~5；

步骤（3）所述的稀盐酸浓度为0.01~0.1 M，重量为析出物重量的50~100倍；所述的金属粒为锡粒；步骤（3）所述加入金属粒进行反应为在25~85 ^oC反应1~18小时；所述硫化氢添加量为1~10 L；步骤（3）所述进行pH和浓度的调节为使用磷酸二氢钠和磷酸氢二钠把pH值调节到4.5~6.5，用pH值4.5~6.5的磷酸缓冲溶液把半胱氨酸溶液浓度调节到0.1~1wt%；

步骤（4）所述的N-羟基琥珀酰亚胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐为N-羟基琥珀酰亚胺0.0005~0.005 g/ml，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐0.001~0.005 g/ml；步骤（4）中原料用量关系为：按照质量比计，步骤（3）得到的牛皮胶原蛋白溶液:牛毛半胱氨酸溶液=1~5:1；步骤（4）所述的搅拌时间为4~36小时。

2.根据权利要求1所述的一种牛皮制备可注射温敏水凝胶的方法，其特征在于：步骤（1）所述的脱脂为将去除牛毛的牛皮浸泡于5~10wt%碳酸钠溶液中10~30分钟；碳酸钠溶液的体积为牛皮体积2~5倍。

3.一种如权利要求1或2所述方法制备的可注射温敏水凝胶。

4.如权利要求3所述的可注射温敏水凝胶在制备腔洞型伤口修复材料上的应用。