[发明专利]一种对饲料中四十八种兴奋剂进行同时检测的方法

说明书

本发明一种对饲料中四十八种兴奋剂进行同时检测的方法，先用甲醇对试样进行两次的提取，再将合并得到的上清液吹干，通过用乙腈的水溶液溶解得到的残渣，经涡旋振荡和过滤，得到待测液，利用高效液相色谱串联质谱仪测定待测液和混合标准工作液中的兴奋剂，通过得到的谱图信息进行比对，判断试样中存在相应的目标物；根据待测兴奋剂和对应内标物的峰面积，结合各个待测液获得过程中的提取体积、试样量、稀释倍数，采用外标法定量，求出齐帕特罗、非诺特罗、去甲乌药碱和苯丙酸诺龙的含量，采用内标法定量可求出除齐帕特罗、非诺特罗、去甲乌药碱和苯丙酸诺龙以外所有兴奋剂的含量。

技术领域

本发明涉及兴奋剂检测技术领域，具体为一种对饲料中四十八种兴奋剂进行同时检测的方法。

背景技术

兴奋剂检测是运动会比赛过程中最重要的一个监督环节，因为饲料中会被添加兴奋剂，动物在食用含兴奋剂的饲料后，会造成肌肉及组织中不同程度的残留，继而通过生物链在人体内残留，将导致食用者出现不同程度的中毒现象。为维护竞技体育的公平和纯洁，保证运动员的身体健康与生命安全，开展饲料及饲料添加剂中兴奋剂的检测是从食品安全源头进行控制的有效手段。

但是兴奋剂种类繁多，结构差异大，目前主要有β2-激动剂兴奋剂、蛋白同化制剂类兴奋剂、糖皮质激素兴奋剂和利尿剂类兴奋剂这48种常见兴奋剂需要进行检测。

兴奋剂本身的检测技术也在不断发展中，以前曾采用高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、气相色谱-质谱联用(GC/MSD)等方法进行检测，但是以上48种常见兴奋剂中的某些兴奋剂检测过程中需要衍生化、会产生操作复杂、检测周期长、灵敏度较差等问题，导致目前不能对饲料中四十八种常见的兴奋剂进行同时检测。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种对饲料中四十八种兴奋剂进行同时检测的方法，能同时检测饲料中常见的48种兴奋剂。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种对饲料中四十八种兴奋剂进行同时检测的方法，所述同时检测的四十八种兴奋剂为克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、特布他林、沙美特罗、非诺特罗、妥布特罗、喷布特罗、西马特罗、肾上腺素、普萘洛尔、阿替洛尔、美托洛尔、克仑丙罗、曲托喹酚、去甲乌药碱、美雄酮、司坦唑醇、甲基睾酮、丙酸睾酮、诺龙、丙酸诺龙、苯丙酸诺龙、勃地酮、群勃龙、睾酮、β-玉米赤霉醇、泽仑诺、齐帕特罗、泼尼松、泼尼松龙、地塞米松、倍他米松、氟氢可的松、甲基泼尼松龙、倍氯米松、可的松、氢化可的松、乙酰唑胺、坎利酮、氯噻酮、呋塞米、螺内酯、卞氟噻嗪、氯噻嗪、氢氯噻嗪、氨苯蝶啶和4-氨基-6-氯苯-1，3二磺酰胺，包括如下步骤：

步骤1，在试样中加入与所述四十八种兴奋剂对应的混合同位素内标中间液，之后用甲醇进行提取，试样和甲醇的比例为(1.9～2.1)g：10mL从得到的提取液中分离出上层清液，然后将提取液的剩余部分用相同的方式进行提取，合并两次上层清液，得到上清液，将上清液吹干后用乙腈的水溶液溶解，最后涡旋振荡、过滤，得到待测液；

步骤2，将待测液用高效液相色谱串联质谱仪进行测定，得到相应的谱图信息；

将由所述的四十八种兴奋剂标准物质和与所述四十八种兴奋剂对应的同位素内标标准物质配制的混合标准工作液，用与待测液相同的条件进行测定，得到相应的谱图信息；

步骤3，将步骤2形成的两组谱图信息进行比对，得到所述待测液和混合标准工作液中除倍他米松和地塞米松外所有兴奋剂的色谱峰峰面积，以及混合标准工作液和所述待测液中对应的内标物的峰面积；

将步骤2所述的待测液按照相同的条件，用高效液相色谱串联质谱仪进行测定，得到相应的谱图信息；将该谱图信息与混合标准工作液对应的谱图信息进行比对，得到所述待测液和混合标准工作液中倍他米松和地塞米松的色谱峰峰面积，以及混合标准工作液和所述待测液中倍他米松、地塞米松对应的内标物的峰面积；