[发明专利]circ_0000173作为卵巢癌预后、治疗标志物的应用

说明书

环状RNA circRNA_0000173在卵巢癌组织中表达上调；其高表达可预测预后不良；抑制circRNA_0000173表达能够抑制了卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮‑间充质转化,circRNA_0000173可通靶向性结合PKM2蛋白，在肿瘤发生和转移中发挥了促进作用。提示circRNA_0000173是一个新的诊断生物标志物和一个强有力的卵巢癌治疗靶点。

技术领域

本发明涉及分子检测技术领域,尤其涉及circRNA检测和治疗卵巢癌的方法。

背景技术

卵巢癌为女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，近年来其发病率趋于稳定，但死亡率仍呈上升趋势，是妇科恶性肿瘤死亡的主要原因，居女性肿瘤相关死亡原因的第五位。卵巢癌发病隐匿，早期通常无明显症状，且缺乏有效的筛查和早期诊断措施，待确诊时70％的患者已处于晚期。就世界范围而言，女性一生中发生卵巢癌的风险比为1.4～1.5％，而卵巢癌的死亡风险比约为1％。针对卵巢癌组织异质性以及高通量测序的研究表明，卵巢肿瘤中大多为上皮性卵巢癌(Epithelial Ovarian Cancer,EOC)。虽然进行肿瘤细胞减灭术的基础上辅以铂类和紫杉醇为主的化疗，以及近年来免疫疗法和腹腔热灌注化疗等新疗法的尝试，但其临床缓解的平均时间为两年，五年生存率仅在30％左右。卵巢癌高死亡率的原因主要包括早期筛检指标较少、早期诊断困难，同时伴随高转移和复发，此外，卵巢癌在手术治疗过程中难以完全清除病灶，致使术后复发率高、预后差。因此，探究新的卵巢癌发病机制、寻找潜在的诊治靶标和肿瘤标志物，是目前卵巢癌基础和临床研究领域亟待解决的重点和难点。

近年来，表观遗传学在卵巢癌领域的研究进展十分迅速。表观遗传能从染色质、DNA、蛋白质和RNA水平调节基因的表达，主要包括DNA甲基化、组蛋白修饰、核小体重构和非编码RNA调节等^[7]，其中RNA在表观遗传调控过程中起着关键作用，不仅可以作为从DNA到蛋白质的信息传递中间体，且其本身也具有各种生物学功能。环状RNA(Circular RNA,circRNA )是近年来备受关注的一种具有闭合环状结构的一种新型非编码RNA，其表达水平高、稳定且分布广泛。circRNA根据其组成和循环机制的不同主要分为3个类别：外显子circRNA、内含子circRNA和外显子-内含子circRNA。

circRNA由前体mRNA(pre-mRNA)产生，并由RNA聚合酶II转录，该结构使得circRNA缺乏5’多聚A尾，此特征使得成熟的circRNA结构稳定、序列保守、高度丰富，并在特殊条件下动态表达在特定组织内部。因此circRNA可以抵抗核酸外切酶的降解，而circRNA表达丰富，在各个物种间较为保守，且其表达具有组织及发育时序的特异性。circRNA因具备以下分子标志物特点：选择性高表达，常与线性RNA(hostgene)的表达量相当，在增生慢的细胞及器官中表达量高；高度稳定，闭合环状的结构可抵抗RNase的降解；在不同的物种间相对保守；特异性表达，circRNA的表达具有组织及发育时序的特异性；便于检测，不仅肿瘤组织中表达，还可以通过血清、尿液检测。目前的研究已证实功能性circRNA可以以多种方式影响肿瘤的发生发展，如内源性竞争抑制microRNA、与circRNA结合蛋白相互作用、调节转录或剪接。在妇科恶性肿瘤领域，已有数篇关于circRNA靶向蛋白质分子或circRNA-miRNA—mRNA网络在女性生殖系统肿瘤发生发展作用中的报道，如circRNA_0049116(circMUC16)在卵巢癌中通过结合ATG13蛋白，上调ATG13在卵巢癌细胞中的表达，增强其自噬，从而促进卵巢癌细胞的增殖和转移^[22]，而circRNA_0132980(circSLC26A4)可通过竞争结合miR-1287-5p，上调HOXA7，进而促进宫颈癌的进展。上述研究提示circRNA在女性生殖系统肿瘤研究中的巨大潜力。尽管如此，人们对circRNA的产生及生物学功能认识还非常有限，关于circRNA对妇科常见恶性肿瘤尤其是恶性度和病死率极高的卵巢癌的发生、发展中的作用及相关机制不甚了解。