[发明专利]一种高活性阿卡波糖产生菌的筛选方法和培养方法在审
申请号: | 202110857524.2 | 申请日: | 2021-07-28 |
公开(公告)号: | CN113444670A | 公开(公告)日: | 2021-09-28 |
发明(设计)人: | 郑长春;金伟;朱维忠;慕东;刘晋锋;田晓梅;戴晓艳 | 申请(专利权)人: | 山东鲁抗医药股份有限公司 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;C12R1/045 |
代理公司: | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人: | 张梦泽 |
地址: | 272000 山*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 活性 阿卡波糖 产生 筛选 方法 培养 | ||
1.一种高活性阿卡波糖产生菌的筛选方法,包括以下步骤:
将若干游动放线菌SE50的单菌落转接于平板培养基,于25~30℃培养5~7d,选取未开花、菌落形状为椭圆形且长轴为5~10cm的菌种作为目标菌种,得到高活性阿卡波糖产生菌。
2.根据权利要求1所述的筛选方法,其特征在于,所述选取的条件还包括颜色为深黄色和/或短轴为4~8cm。
3.一种高活性阿卡波糖产生菌的培养方法,包括以下步骤:
1)按照权利要求1或2所述筛选方法筛选得到高活性阿卡波糖产生菌;
2)将所述高活性阿卡波糖产生菌转接至茄子瓶培养基,进行扩大培养,得到菌体;
3)将扩大培养得到的菌体转接至种子培养基,进行种子培养,得到处于对数生长期的种子液;
4)将所述对数生长期的种子液转接至发酵培养基,进行发酵培养,得到发酵产物;所述发酵产物中包含阿卡波糖。
4.根据权利要求3所述的培养方法,其特征在于,步骤2)中所述扩大培养的温度为25~30℃;所述扩大培养的时间为5~7d。
5.根据权利要求3所述的培养方法,其特征在于,步骤3)中所述种子培养的温度为25~30℃;所述种子培养的时间为42~48h。
6.根据权利要求3或5所述的培养方法,其特征在于,步骤3)中所述种子液的pH值为6.5~7.5;所述种子液中菌体的质量浓度为20%~30%;所述种子液的颜色为深黄色。
7.根据权利要求3所述的培养方法,其特征在于,步骤4)中所述种子液和发酵培养基的体积比为1:(8~12)。
8.根据权利要求3或7所述的培养方法,其特征在于,步骤4)中所述发酵培养于25~30℃、振荡条件下进行;所述发酵培养的时间为6~8d;所述振荡的频率为200~300rpm;所述振荡的振幅为45~55mm。
9.根据权利要求3或7所述的培养方法,其特征在于,步骤4)中所述发酵培养进行至48~50h时,第一次补加葡萄糖水溶液;所述发酵培养进行至98~100h时,第二次补加葡萄糖水溶液;每次补加的葡萄糖水溶液占发酵培养基的体积比独立为(1~3):25;所述葡萄糖水溶液的质量浓度为50%。
10.根据权利要求3或7所述的培养方法,其特征在于,步骤4)中所述发酵产物的pH为6.4~6.8;所述发酵产物中菌体的质量浓度为28%~32%。
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