[发明专利]一种平颏海蛇来源内毒素中和肽及其编码序列与应用

说明书

本发明涉及海洋生物医药领域，具体是一种新型平颏海蛇来源内毒素中和肽及其编码序列与应用。本发明获得的内毒素中和肽Hc‑ENP有显著的LPS拮抗能力，炎性因子释放与炎性相关酶表达水平测定实验中，Hc‑ENP能够显著抑制炎性因子的释放，降低炎性相关酶表达水平，发挥抗炎效应。并且，本发明获得的内毒素中和肽Hc‑ENP能够有效拮抗不同来源LPS的致炎效应，有广谱的抗炎效果。本发明中涉及的平颏海蛇来源内毒素中和肽Hc‑ENP在抗革兰阴性菌药物、抗炎药物等方面有很大的应用价值。

技术领域

本发明属于海洋生物医药领域，具体涉及一种新型平颏海蛇来源内毒素中和肽及其编码序列与应用。

背景技术

海蛇属蛇目眼镜蛇科海蛇亚科，是一类分布广泛、种类丰富的有毒海洋生物。已有大量研究表明，海蛇毒中富含多种生物活性物质，包括海蛇毒素蛋白和一些活性强烈、具有良好开发前景的新功能多肽和蛋白。我国海域优势种海蛇为平颏海蛇和青环海蛇，自古以来，中医中就有利用海蛇毒抗炎和抗菌的应用，而前期海蛇毒腺转录组结果表明，平颏海蛇毒腺中含有很多与炎性通路相关的组分，尽管如此，目前对海蛇毒中抗炎和抗菌活性肽的组成、序列信息、表达水平等尚未有系统的了解。

内毒素LPS是革兰阴性菌细胞壁的重要组成部分，可分为类脂A、O抗原和核心多糖三部分。LPS各部分在不同菌株、甚至不同生长环境下的同种菌株之间都有差异，O抗原是LPS中最易变化的部分，而类脂A是结构变化最小的部分，在不同菌株之间较为保守，同时，类脂A也是LPS最重要的致病成分。

内毒素LPS与革兰阴性菌感染后的全身性炎症反应关系密切，是一系列炎症反应重要的刺激因子。在革兰阴性菌被杀灭或裂解后，细胞壁上的LPS会大量释放到周围介质中，高浓度的LPS可引起机体发热、败血症、感染性休克等，最终诱发机体多器官功能衰竭而导致死亡。因此，探寻可特异性结合LPS的活性分子是目前抗革兰阴性菌感染的重要思路。根据文献报道，LPS主要通过激活MAPK、NF-κB、TLRs等信号通路来诱发炎症反应，前期的平颏海蛇毒腺转录组结果显示，在这3条炎性通路中均有大量的unigenes注释，因此我们推测平颏海蛇毒腺中存在影响LPS促炎作用的活性分子，以LPS为靶分子在海蛇毒腺噬菌体展示库中淘选能与之结合的活性分子是可行的。

目前，国内外尚无对平颏海蛇来源内毒素中和肽的研究报道，本发明中涉及的平颏海蛇来源内毒素中和肽是我们首次发现，且是平颏海蛇抗炎和抗菌系统的重要活性组分。该多肽在抗革兰阴性菌感染、抗内毒素炎症的研究中具有良好的应用前景。

发明内容

本发明目的在于提供一种新型平颏海蛇来源内毒素中和肽及其编码序列与应用。本发明通过构建平颏海蛇毒腺噬菌体多肽展示库，以内毒素(LPS)为靶分子，对该噬菌体展示库进行淘选，通过测定和分析，获得了一条能结合内毒素的21肽即命名为Hc-ENP。将该海蛇来源21肽合成后，活性检测发现，其具有明确的内毒素中和能力。本发明的另一目的在于提供上述海蛇来源内毒素中和肽在制备抗革兰阴性菌感染、抗炎药物中的应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面，提供一种平颏海蛇来源的内毒素中和肽，其氨基酸序列如SEQID NO.2所示。

所述的平颏海蛇来源内毒素中和肽是首次发现的具有明显抗炎活性的海蛇来源内毒素中和肽，该多肽理论分子量2523.15，理论等电点10.76，富含碱性氨基酸，在中性环境中呈现明显的正电荷。

本发明还提供了一种如上所述的平颏海蛇来源内毒素中和肽的编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

SEQ ID NO.1：

5’-GGTGTTAAAGCTGCGAAGAAATTTAAAATTAACATCCTGAAAAAACTGTTCAACATCTACTGG-3’；

SEQ ID NO.2：