[发明专利]内侧神经节隆起前体细胞的体外产生

权利要求书

1.一种提供GABA能中间神经元富集的细胞培养物的方法，所述方法包括：

a)提供培养基中的灵长类动物多能干(pPS)细胞；

b)向所述培养基中引入包含以下的因子：

i)音速刺猬(shh)路径的活化剂，

ii)SMAD抑制剂；

iii)wnt路径抑制剂，

iv)神经诱导补充物，和

v)Notch路径抑制剂；

其中步骤a)和b)导致GABA能中间神经元富集的细胞培养物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述pPS细胞为人诱导多能干细胞。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述pPS细胞在饲养层不存在下培养。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述pPS细胞以悬浮培养进行培养。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中两种或更多种SMAD抑制剂被引入所述培养物中。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中抗凋亡剂被引入所述培养物中。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述抗凋亡剂是Rho-相关激酶(ROCK)的抑制剂。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述pPS细胞经过重组方法处理以引入转基因或敲除内源基因。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，还包括分离所述GABA能中间神经元。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述分离包括以机械方式解离拟胚体以产生单细胞或细胞群；将解离的细胞接种在粘附基质上以提供粘附单层；和培养所述粘附单层。

11.根据权利要求9所述的方法，其中所述分离包括使用对所述GABA能中间神经元特异性的亲和标签。

12.根据权利要求9所述的方法，其中所述分离包括以酶的方式解离拟胚体以产生单细胞或细胞群；将解离的细胞接种在粘附基质上以提供粘附单层；和培养所述粘附单层。

13.一种方法，其包括：

a)提供培养基中的灵长类动物多能干(pPS)细胞；

b)向所述培养基中引入包含以下的因子：

i)音速刺猬(shh)路径的活化剂，

ii)SMAD抑制剂；和

iii)wnt路径抑制剂，

以产生MGE前体细胞富集的细胞培养物；和

c)培养所述MGE前体细胞以产生PSA-NCAM阴性和/或DLX2阴性细胞。

14.根据权利要求13所述的方法，其中步骤c)包括在Notch路径抑制剂不存在下培养所述MGE前体细胞。

15.根据权利要求13或14所述的方法，其中所述MGE前体细胞表达Nkx2.1。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述MGE前体细胞表达OLIG2。