[发明专利]一种海南粗榧枝叶的三尖杉碱的含量检测方法

说明书

本发明提供一种海南粗榧枝叶的三尖杉碱的含量检测方法，包括以下步骤：(1)采用高效液相色谱检测不同浓度的对照品溶液并绘制标准曲线；(2)配制供试品溶液：取海南粗榧枝叶粉末，加入乙醇溶液，称定重量，超声，以乙醇溶液补足减失的重量；滤过，取续滤液，水浴蒸干，用氨水复溶，以二氯甲烷萃取，得二氯甲烷萃取液，水浴蒸干，加无水乙醇复溶，滤过，取续滤液，即得；(3)HPLC检测：取供试品溶液，采用高效液相色谱检测，根据标准曲线计算三尖杉碱含量；高效液相色谱条件为：以phenomenex 00G4444E0型色谱柱为固定相；以体积比28～32：68～72的甲醇与0.2～0.3wt％碳酸铵水溶液为流动相。该方法精密、快速、专属性强，可用于海南粗榧枝叶药材的质量控制。

技术领域

本发明涉及药物检测技术领域，具体涉及一种海南粗榧枝叶的三尖杉碱的含量检测方法。

背景技术

海南粗榧为三尖杉科三尖杉属植物海南粗榧Cephalotaxus hainanensis Li的干燥枝叶。海南粗榧为海南省地产药材，是一种典型的罕见种，收载于《中国植物志》，枝、叶、种子可提取多种植物碱，对治疗白血病及淋巴肉瘤等有一定的疗效。生物碱类、内酯类化合物是海南粗榧的主要化学成分。海南粗榧中分离的生物碱主要有三尖杉碱(Cephalotaxine)、三尖杉酯碱(Harringtonine)、高三尖杉酯碱(Homoharringtonine)、异三尖杉酯碱(Iso-harringtoine)和脱氢三尖杉酯碱(Deoxyharringtoine)等。

相关研究报道^[1]采用反相高效液相色谱法测定三尖杉(Cephalotaxus fortuneiHook.f)中三尖杉酯碱，其测定结果显示峰形不够理想且杂质较多，出峰时间也较晚。此外，其检测的是三尖杉酯碱，且原材料是三尖杉(Cephalotaxus fortunei Hook.f)。海南粗榧属于三尖杉属的罕见种，其化学成分及含量与其他种有所差异，这些差异可能影响含量检测结果的准确性。

目前部分研究主要检测的是酯碱类，鲜见关于海南粗榧枝叶的三尖杉碱的含量检测方法。其他三尖杉的检测手段也不完全适用于海南粗榧枝叶。因此有必要提供一种海南粗榧枝叶的三尖杉碱的含量检测方法，建立海南粗榧枝叶的质量标准。这对于促进海南粗榧的产业化利用具有重要的意义。

[1]江慧,胡奎,王凡,刘先福,李俊凯.反相高效液相色谱法测定三尖杉中三尖杉酯碱研究[J].长江大学学报(自科版),2014,11(29):56-58+7。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种海南粗榧枝叶的三尖杉碱的含量检测方法。

本发明技术方案主要包括以下内容：

一种海南粗榧枝叶的三尖杉碱的含量检测方法，包括以下步骤：

(1)绘制标准曲线：取三尖杉碱对照品，制成对照品溶液；取不同浓度的对照品溶液，采用高效液相色谱检测并绘制标准曲线；

(2)配制供试品溶液：取海南粗榧枝叶粉末，加入乙醇溶液，称定重量，超声，以乙醇溶液补足减失的重量；滤过，取续滤液，水浴蒸干，用氨水复溶，以二氯甲烷萃取，得二氯甲烷萃取液，水浴蒸干，加无水乙醇复溶，滤过，取续滤液，即得；

(3)HPLC检测：取供试品溶液，采用高效液相色谱检测，根据标准曲线计算三尖杉碱含量；

高效液相色谱条件为：以phenomenex 00G4444E0型色谱柱为固定相；以体积比28～32：68～72的甲醇与0.2～0.3wt％碳酸铵水溶液为流动相。

优选的，检测波长为291nm。

优选的，色谱柱长度为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm。

优选的，流动相流速为0.8～1.2mL/min。