[发明专利]一种污染胚胎的处理方法

说明书

本发明公开了一种污染胚胎的处理方法，该方法在发现胚胎被细菌污染后，立即对胚胎进行反复多次洗涤及更换培养液，削薄或去除胚胎透明带后继续培养至囊胚期，使用特殊胚胎体外培养方式等手段，获得了相对较好的培养效果和临床结局，患者在胚胎移植后成功妊娠，目前状态良好。

技术领域

本发明涉及辅助生殖技术领域，尤其涉及一种污染胚胎的处理方法。

背景技术

辅助生殖技术是人类辅助生殖技术(Assisted Reproductive Technology，ART)的简称，指采用医疗辅助手段使不育夫妇妊娠的技术，包括人工授精(ArtificialInsemination，AI)和体外受精-胚胎移植(In Vitro Fertilization and EmbryoTransfer，IVF-ET)及其衍生技术两大类。试管婴儿就是使用该技术的体外受精—胚胎移植方法生育的婴儿。世界首例试管婴儿的诞生被誉为继心脏移植成功后20世纪医学界的又一奇迹，激发了全球许多国家研究这一高新技术的热潮。

在进行体外受精—胚胎移植周期中，为使配子和胚胎在体外能够良好的生长发育，体外受精(in vitro fertilization，IVF)实验室执行严格的质量控制与管理，包括实验室仪器设备、培养用耗材与培养液、技术人员、培养环境等，实验室程序和操作的每一步都必须以严格的无菌技术纪律进行。IVF-ET过程中胚胎污染的来源大致为3个方面：精液、卵泡液和IVF培养系统及环境。虽然胚胎污染的发生率不高，但是，胚胎污染一旦发生将对整个取卵周期的结局造成很大的影响，导致卵子的退化，受精率低下、损伤胚胎的发育潜能、妊娠率和种植率低下，甚至污染可能扩大到整个实验室培养体系，目前，据报道国外胚胎污染率大约0.35％～0.69％，国内为0.51％

在胚胎发生污染时，目前常用的方法是使用含有抗生素的培养液充分洗涤，最大可能的去除胚胎表面的细菌。但是，由于胚胎透明带外表面是一种网状结构，这种结构在发生微生物污染时很容易使体积较小的细菌藏匿其中，因此，多数情况下在洗涤后仍会有细菌的生长。另外，使用细菌敏感的抗生素处理被污染的胚胎也是常用的方法之一，但是，这种方法首先需要进行细菌抗药性实验，要3-5天才能出结果。而发生污染事件时需要马上进行处理，因此，在这种情况下，往往是随机选择一种抗生素进行处理，或者是先将胚胎进行冷冻保存，等细菌抗药性实验结果出来后再解冻处理。但是，胚胎在冷冻和解冻过程中会有冷冻损伤，严重时会发生退化，导致胚胎直接死亡，并且这项操作会增加患者经济负担。因此，在胚胎培养过程中发生污染时，需要一种及时有效方法进行处理，最大限度的保障患者的利益。目前尚未发现其他利用此方法处理污染后胚胎的研究。

发明内容

鉴于现有技术中存在的问题，我们开发了一种污染胚胎的处理方法，该方法可以在体外受精过程中对被细菌污染的胚胎进行挽救，成功率较高。利用此方法，已成功帮助一位胚胎污染患者获得了妊娠，目前状态良好。

一种污染胚胎的处理方法，其特征在于，包括以下步骤：

S0：预平衡洗涤液的制备：将受精液或胚胎培养液在培养箱中平衡过夜，得预平衡洗涤液；

S1：预平衡胚胎培养液制备：将胚胎培养液在培养箱中平衡过夜，得预平衡胚胎培养液；

S2：预平衡酸性台氏液的制备：将酸性台氏液在37℃平衡15-60min，得预平衡酸性台氏液；

S3：液滴制备：在培养皿中制作步骤S2中的预平衡酸性台氏液滴和步骤S1中的预平衡胚胎培养液滴；

S4：去透明带处理：污染胚胎在步骤S0的预平衡洗涤液中洗涤，再放入步骤S3的预平衡酸性台氏液滴中，至透明带溶解5-10秒，再置于步骤S3的预平衡胚胎培养液滴中洗涤，得去透明带胚胎

S5：胚胎培养：将步骤S4中去透明带胚胎置于time-lapse培养皿内培养，或正常培养皿内倒置培养，再置于培养箱中培养24-48h；