[发明专利]一种体外诱导小鼠耳朵间充质干细胞分化为脂肪细胞的方法

说明书

本发明涉及细胞诱导技术领域，具体涉及一种体外诱导小鼠耳朵间充质干细胞分化为脂肪细胞的方法。将小鼠耳朵间充质干细胞于DMEM培养基中培养至细胞长满后，使其接触抑制48‑50h，然后更换为分化培养基Ⅰ，48‑50h后换为分化培养基Ⅱ，直至得到脂肪细胞；所述分化培养基Ⅰ组成为：50mL 10％血清培养基+50μL地塞米松+50μL IBMX+100μL胰岛素+4‑6μL三碘甲状腺原氨酸；所述分化培养基Ⅱ组成为：50mL 10％血清培养基+100μL胰岛素+4‑6μL三碘甲状腺原氨酸；所述10％血清培养基组成为：45mL DMEM+5mL FBS+50μL庆大霉素。本发明的方法通过在分化培养基中加入三碘甲状腺原氨酸，显著的提高了脂肪细胞的分化效率。

技术领域

本发明涉及细胞诱导技术领域，具体涉及一种体外诱导小鼠耳朵间充质干细胞分化为脂肪细胞的方法。

背景技术

脂肪组织工程概念的提出为软组织缺损的修复与重建提供了全新的治疗途径,已成为组织工程研究领域的热点之一。间充质干细胞(mesechymalstemcells，MSCs)是一小群存在于骨髓中的非造血细胞，具有高度的自我更新和多向分化潜能，在适宜的条件下可诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞等，这些特点使得它成为组织工程理想的种子细胞。

目前，现有技术已经公开了一些诱导间充质干细胞分化为脂肪细胞的方法，但是分化效率较低，仅能达到30％-40％，且分化周期长。

发明内容

有鉴于上述技术问题，本发明的的目的在于提供一种体外诱导小鼠耳朵间充质干细胞分化为脂肪细胞的方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种体外诱导小鼠耳朵间充质干细胞分化为脂肪细胞的方法，将小鼠耳朵间充质干细胞于DMEM培养基中培养至细胞长满后，使其接触抑制48-50h，然后更换培养基为分化培养基Ⅰ，48-50h后换为分化培养基Ⅱ，直至得到脂肪细胞；

所述分化培养基Ⅰ组成为：50mL 10％血清培养基+地塞米松50μL+IBMX50μL+100μL胰岛素+4-6μL三碘甲状腺原氨酸；

所述分化培养基Ⅱ组成为：50mL 10％血清培养基+100μL胰岛素+4-6μL三碘甲状腺原氨酸；

所述10％血清培养基组成为：45mL DMEM+5mL FBS+50μL庆大霉素。

进一步的，培养条件为37℃，CO₂体积分数5％。

进一步的，所述小鼠耳朵原代细胞的分离包括以下步骤：

S1、剪下4周龄小鼠的外耳，将外耳脱去毛发，PBS缓冲液洗涤2-3次后，置于胶原酶混合物中，并将外耳剪碎；

S2、将剪碎的外耳及胶原酶混合物于37℃下培养40-60min，后用70μm滤网过滤，保留滤液；

S3、在滤液中加入等体积的含15％胎牛血清的DMEM培养基，离心，保留沉淀，用含15％胎牛血清的DMEM培养基将沉淀混成悬液，混匀，于37℃，CO₂体积分数为5％的条件下培养，期间更换为含10％胎牛血清的DMEM培养基，培养5-10天后，得到小鼠耳朵间充质干细胞。

更进一步的，S1中，所述小鼠为C57BL/6J小鼠。

更进一步的，S2中培养为50rpm培养1h或水浴40min、且每隔5min吹打混匀一次。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：