[发明专利]葡聚糖凝胶色谱柱及脐血间充质干细胞外泌体的分离方法

权利要求书

1.一种葡聚糖凝胶色谱柱，其特征在于，包括U型柱管、脱脂棉球和收集管；

所述U型柱管内部设置有葡聚糖凝胶，并且底部设置有收集口，所述收集口上设置有开关；

所述脱脂棉球设置于所述收集口内；

所述收集管位于所述收集口的下方。

2.根据权利要求1所述的葡聚糖凝胶色谱柱，其特征在于，所述葡聚糖凝胶色谱柱还包括固定支架、环套、连杆和固定螺丝；

所述环套设置在所述U型柱管外壁上；

所述连杆一端与所述环套连接，另一端通过所述固定螺丝固定在所述固定支架上。

3.根据权利要求1或2所述的葡聚糖凝胶色谱柱，其特征在于，所述葡聚糖凝胶占所述U型柱管体积的0.15～0.3倍，所述U型柱管的体积为800～1200ml。

4.一种采用权利要求1～3任一所述的葡聚糖凝胶色谱柱分离脐血间充质干细胞外泌体的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(a)将葡聚糖凝胶进行溶胀，再置于所述U型柱管中；

(b)在所述U型柱管中添加灭菌去离子水进行搅拌，然后，打开所述收集口开关进行排液，重复2～4次；

(c)将脐血干细胞培养液进行高速离心，收集上清液；

(d)将所述上清液缓慢加入至所述U型柱管中，待液面平衡后，打开所述收集口开关，采用所述收集管收集排出液，待液面降至距葡聚糖凝胶表面0～0.5cm时，关掉所述收集口开关，将生理盐水缓慢加入至所述U型柱管中，待液面平衡，再打开所述收集口开关，继续收集排出液，其中，排出液按照每管5～7ml进行收集；

(e)采用全波长紫外分光光度仪对每管排出液进行测定，并进行高倍显微镜观察，根据测定和观察结果确定含有脐血间充质干细胞外泌体的收集管；

(f)按照收集时间将含有脐血间充质干细胞外泌体的收集管的第一管和最后一管进行去除，再将中间的收集管进行合并，即得脐血间充质干细胞外泌体。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(c)中，高速离心的离心力rcf不低于12000g。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(d)中，上清液的添加体积为所述葡聚糖凝胶体积的0.3～0.5倍。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(e)中还包括标记含有脐血间充质干细胞外泌体的收集管的收集时间和顺序，作为后续处理的参照。

8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(a)中，溶胀包括：

将葡聚糖凝胶置于去离子水中加热煮沸3～5h。

9.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：

葡聚糖凝胶使用3～4次后，将葡聚糖凝胶置于去离子水进行高温煮沸4～5h，然后，再继续装柱使用。