[发明专利]一种HPLC-MS/MS联用检测人血浆中奥美拉唑的方法

说明书

本发明涉及一种HPLC‑MS/MS联用检测人血浆中奥美拉唑的方法，它包括以下步骤：(1)人血浆样品前处理；(2)液相色谱‑质谱联用检测，采用流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱，其中：流动相A为甲醇‑乙腈混合溶液，在混合溶液中甲醇与乙腈的体积比为3～5:7～5；流动相B为2～20mM甲酸铵水溶液；(3)人血浆中奥美拉唑浓度的测定。本发明以氘代奥美拉唑作为内标物，采用Welch Ultimate XB‑C18进行梯度洗脱，氘代内标和待测物具有相同的保留时间、化学性质和基质效应，测定血浆中奥美拉唑浓度的重现性、准确度均较好。本发明方法可用于评价奥美拉唑各剂型的生物等效性。

技术领域

本发明属于生物分析技术领域，具体涉及一种HPLC-MS/MS联用检测人血浆中奥美拉唑的方法。

背景技术

奥美拉唑属于苯并咪唑类抗酸分泌化合物，能通过特异性抑制胃壁细胞表面的H⁺/K⁺-ATP酶系统而抑制胃酸分泌。奥美拉唑呈弱碱性，遇酸后容易转化成次磺胺化合物，次磺胺化合物肠道生物利用度很低。首次给药生物利用度为35％，连续用药后生物利用度可提高到60％，其原因可能是由于本品使胃酸抑制而使其在胃内分解减少。市售的复方奥美拉唑，能够特异性地作用于胃壁细胞顶端膜构成的分泌性微管和胞浆内的管状泡上，即胃壁细胞质子泵H⁺-K⁺ATP酶所在部位，抑制壁细胞泌酸的最后步骤，使壁细胞的H⁺不能转运到胃腔中去，以致胃液中胃酸量大为减少，对各种刺激因素引起的胃酸分泌均有很强的抑制作用。

目前，国内文献有报道采用液质联用测定奥美拉唑含量的方法。例如，文献液相色谱-串联质谱法同时测定人血浆中奥美拉唑及其代谢产物奥美唑砜的质量浓度(陈晨，沈阳药科大学，2020)，中公开了血浆中奥美拉唑的检测方法，但是在洗脱的过程中未公开使用洗针液，且检测方法有残留，可能使样品检测结果与真实值有差距。文献液相色谱-串联质谱法测定人血浆中奥美拉唑的血药浓度及其药动学(任秀华，华中科技大学同济医学院附属同济医院药学部)中也公开了血浆中奥美拉唑的检测方法，但是在检测方法中使用非氘代内标兰索拉唑作内标，无法控制分析物与内标的基质效应相同，可能使样品检测结果与真实值有差距，血浆用量为200μL，血浆用量较多不适用于大批量分析样品。

中国专利CN 111337615 A公开了血浆中奥美拉唑的检测方法，但是在检测方法中采用等度洗脱，奥美拉唑的保留时间在6.63min，运行时间为10min，不适用于大批量样品分析。

为满足临床大批量样品分析评价药物生物等效性的需求，需开发更简单、可靠、高通量的样品预处理方法以及用于检测人血浆中奥美拉唑浓度的方法。

发明内容

本发明的目的是在现有技术的基础上，提供一种重现性好、灵敏度高、分析速度快、基质效应影响小，提取回收率较高的检测人血浆中奥美拉唑浓度的方法。

本发明的技术方案如下：

一种HPLC-MS/MS联用检测人血浆中奥美拉唑的方法，它包括以下步骤：(1)人血浆样品前处理；(2)液相色谱-质谱联用检测，采用流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱，其中，流动相A为甲醇-乙腈混合溶液，在混合溶液中甲醇与乙腈的体积比为3～5:7～5；流动相B为2～20mM甲酸铵水溶液；(3)人血浆中奥美拉唑浓度的测定；梯度洗脱过程如下：在0-0.5分钟内，流动相A和流动相B的体积比为45:55；在0.5-2.0分钟内，流动相A和流动相B的体积比由45:55匀速渐变至95:5；在2.0-2.8分钟内，流动相A和流动相B的体积比为95:5；在2.8-3.2分钟内，流动相A和流动相B的体积比由95:5匀速渐变至45:55；在3.2-4.5分钟内，流动相A和流动相B的体积比为45:55。具体的梯度洗脱过程如表1：

表1：奥美拉唑液相色谱梯度