[发明专利]快速检测金黄色葡萄球菌、沙门氏菌或/和志贺氏菌的LAMP引物及方法

权利要求书

1.快速检测金黄色葡萄球菌、沙门氏菌或/和志贺氏菌的LAMP引物，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No.1~6、SEQ ID No.19～24或/和SEQ ID No.37～42所示。

2.快速检测金黄色葡萄球菌、沙门氏菌或/和志贺氏菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1、采用叠氮溴乙锭对样本进行前处理，用磁珠法提取DNA；

步骤2、向步骤1提取好的DNA样本中加入LAMP反应体系，所述LAMP反应体系为单重反应体系或三重反应体系，所述单重反应体系包括1套nuc 引物、1套 invA引物或1套ipaH 引物，10×LAMP buffer，dNTPs，Betaine，8U Bst DNA聚合酶， DNA模板，ddH₂O，反应pH为8.8；所述三重反应体系包括1套nuc 引物、1套 invA引物和1套ipaH 引物，10×LAMP buffer，dNTPs，Betaine，8U Bst DNA聚合酶，DNA模板，ddH₂O，反应pH为8.8；1套nuc 引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1~6所示，1套 invA引物核苷酸序列如SEQ ID No. 19～24所示；1套ipaH引物核苷酸序列如SEQ ID No. 37～42所示；

步骤3、将步骤2所得产物进行通过浊度仪进行检测。

3.如权利要求2所述方法，其特征在于，步骤2中，单重反应体系的反应温度为65℃。

4.如权利要求2所述方法，其特征在于，步骤2中，单重反应体系中dNTPs 浓度为0.6～1.4mmol/L；

优选的，步骤2中，单重反应体系中dNTPs 浓度为1.0mmol/L。

5.如权利要求2所述方法，其特征在于，步骤2中，单重反应体系中的10×LAMP buffer中Mg²⁺浓度为2～10mmol/L；

优选的，步骤2中，单重反应体系的引物为1套nuc 引物时，Mg²⁺浓度为4～6mmol/L；

优选的，步骤2中，单重反应体系的引物为1套invA 引物时，Mg²⁺浓度为4～8mmol/L；

优选的，步骤2中，单重反应体系的引物为1套ipaH 引物时，Mg²⁺浓度为4mmol/L。

6.如权利要求2所述方法，其特征在于，步骤2中，三重反应体系的反应温度为60℃。

7.如权利要求2所述方法，其特征在于，具体的，步骤2中，三重反应体系中的10×LAMPbuffer中Mg²⁺浓度2～10mmol/L；

优选的，步骤2中，三重反应体系中的10×LAMP buffer中Mg²⁺浓度4mmol/L。

8.如权利要求2所述方法，其特征在于，步骤2中，三重反应体系中3套引物总浓度为1～3μmol/L；

优选的，步骤2中，三重反应体系中3套引物总浓度为1.5μmol/L。

9.如权利要求2所述方法，其特征在于，步骤2中，三重反应体系中dNTPs 浓度0.6～1.4mmol/L；

优选的，步骤2中，三重反应体系中dNTPs 浓度1.0mmol/L。